Validation of HPLC method for determination of organic acids in beverages

Diplomová práce se zabývá validací RP–HPLC metody pro stanovení organických kyselin v ovocných šťávách. Cílem práce bylo zjištění vhodnosti metody pro ověření autenticity ovocných šťáv na základě analýzy organických kyselin. Teoretická část se zabývá chemickým složením ovoce a ovocných šťáv s důrazem na organické kyseliny. Dále jsou popsány metody analýzy organických kyselin. Detailněji je popsána metoda vysokoúčinné kapalinové chromatografie a postupy při její validaci. Experimentální část práce je zaměřena na optimalizaci a validaci metody. Analyzovány byly kyselina jablečná, citronová, jantarová a askorbová. Byly ověřeny validační parametry: opakovatelnost, linearita, mez detekce (LOD) a mez stanovitelnosti (LOQ). Validovanou RP–HPLC metodou byly analyzovány reálné vzorky 100% ovocných šťáv (jablečná, pomerančová a grapefruitová), u kterých byly ověřeny vybrané parametry autenticity.This diploma thesis focuses on validation of RP–HPLC method for determination of organic acids in fruit juices. The aim of this thesis was to determine suitability of the method for verification of the fruit juices authenticity based on analysis of organic acids. The theoretical part describes chemical composition of fruit and fruit juices and focuses on organic acids. It provides description of various methods of organic acids analysis with more detailed description of High Performance Liquid Chromatography and its validation. The experimental part focuses on optimalization and validation of the method. Samples of malic, citric, succinic and ascorbic acid were analysed. The optimalized method was validated and following performance parameters were determined: repeatability, linearity, limit of detection (LOD) limit of quantitation (LOQ). RP–HPLC method was applied to real samples of 100% fruit juices (apple, orange and grapefruit) and the authenticity parameters were verified.