Human leptospirosis: study for developing tools for diagnosis and evaluation of the utility of serodiagnosis in different stages of the disease

En este trabajo se identificaron regiones antigénicas (P1 y P2) en LipL32. Se obtuvieron antígenos extractivos, sintéticos y recombinantes. Se desarrollaron ELISAs anti-IgG utilizando 4 de estos antígenos. Se evaluaron en forma global y por etapas en base al tiempo de evolución: 1 (menos de 10 días), 2 (10 a 25 días) y 3 (más de 25 días). En la etapa 1 el antígeno extractivo permitió mayor detección de casos que el TR, la Microaglutinación y los antigenos sintéticos y recombinantes. En las otras etapas y evaluación global mostró mayor eficacia que los otros antígenos y concordancia excelente entre sus resultados. La baja sensibilidad del TR en la etapa 1, baja especificidad global y variabilidad intra e inter-operador, indicarían que no es conveniente su utilización como única prueba tamiz. La RT-PCR sería el mejor método para la detección precoz de casos en muestras de hasta 6 días de evolución. En muestras de entre 6 y 9 días de evolución el ELISA extractivo sería la mejor opción. Una combinación de RT-PCR y ELISA con antígeno extractivo resolvería el problema del diagnóstico en la etapa 1en forma global. El serogrupo presumiblemente infectante más frecuente fue Icterohaemorrhagie seguido de Pomona. La mayoría de los casos ocurrieron en adultos de sexo masculino durante los meses cálidos y lluviosos, con fiebre, dolor de cabeza y mialgia. Aunque el trabajo rural continúa siendo un factor de riesgo en Argentina (OR= 3,41; 1,45- 8,06), el contacto con inundaciones fue el factor más importante (OR= 4,49; 1,17 17,25).In this work antigenic regions were identified (P1 and P2) in LipL32. Synthetic peptides and recombinant proteins were designed and obtained. Using four of these antigens ELISAs were then developed to detect IgG antibodies in serum samples. Three stages of the disease were considered: 1 (<10 days), 2 (10 to 25 days) and 3 (> 25 days). In Stage 1, extractive antigen detected more cases than TR, MAT and any of the other three antigens. In Stages 2 and 3 and in overall evaluation extractive antigen showed higher efficacy than the others and an excellent agreement. The low sensitivity of TR in the first stage, its low specificity and high intra and inter operator variability indicate that it is not convenient to use TR the sole screening test. Meta-analysis identified that ELISAs were most effective when applied to patients in the convalescent phase. In this initial period, RT-PCR is the best method for early detection of cases in samples taken up to day six of disease evolution. A combination of RT-PCR and extractive ELISA would be a good choice to solve the problem of diagnosis in this first Stage. The most common presumed infecting serogroup was Icterohaemorrhagiae, followed by Pomona. Most cases occurred in adult males during the warm and rainy season, showing fever, headache and myalgia. Although rural labor remains to be a risk factor in Argentina (OR= 3.41, 1.45; 8.06), prolonged contact with flood was the most important single factor (OR= 4.49, 1.17: 17.25).Facultad de Bioquímica y Ciencias BiológicasInstituto Nacional de Enfermedades Respiratorias "Dr. E. Coni"Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salu