Utilização da tecnologia supercrítica no isolamento de ingredientes biofuncionais - aplicação ao caroço de azeitona e refugo de cereja

Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em BiotecnologiaO projecto que originou esta dissertação encontra-se dividido em duas etapas. Na primeira etapa pretende-se explorar as potencialidades da utilização da tecnologia supercrítica na extracção do caroço de azeitona, um resíduo proveniente da indústria de produção de azeitona de mesa. Esta matriz foi escolhida por se encontrar até à data pouco estudada, utilizou-se o bagaço de azeitona, matriz amplamente estudada, como termo de comparação. Na segunda etapa deste projecto pretende-se estudar a aplicabilidade da extracção supercrítica como um segundo passo num processo integrado de extracção do refugo de cereja para aumentar a selectividade relativamente aos compostos biofuncionais, como o álcool perilílico. Na primeira etapa do projecto produziram-se extractos de caroço e bagaço de azeitona recorrendo a diferentes metodologias. O caroço e bagaço de azeitona foram extraídos em soxhlet com hexano e com sc-CO2 em semi-contínuo utilizando uma instalação de alta pressão e foram obtidos extractos lipídicos. Foi determinada a concentração em polifenóis totais e o perfil polifenólico recorrendo a cromatografia líquida (High-performance liquid chromatography) dos extractos lipídicos obtidos. A actividade antioxidante destes extractos foi determinada recorrendo à avaliação da capacidade de resgate do radical livre peroxilo e à avaliação da capacidade de inibição do radical hidroxilo por parte dos extractos. Efectuou-se a identificação e quantificação dos ácidos gordos e esteróis presentes nesses extractos recorrendo a cromatografia gasosa. A estabilidade oxidativa dos extractos foi determinada recorrendo ao teste de rancimat. Verificou-se que a utilização das diferentes metodologias de extracção permitem produzir extractos ricos em compostos que apresentam bioactividade comprovada como o esqualeno e o ácido oleico. Na segunda etapa deste projecto procedeu-se numa primeira fase à extracção sólido-líquido do refugo de cereja, a qual é o primeiro passo aplicado no processo integrado de tecnologias limpas aqui estudada. Para avaliação do processo global de extracção e das vantagens da utilização da extracção supercrítica como um segundo passo de extracção utilizaram-se os extractos alcoólicos e hidroalcoólicos preparados por extracção convencional sólido-líquido como matriz da extracção supercrítica. A extracção supercrítica dividiu-se em 3 etapas (extracção fraccionada), na primeira fracção a extracção foi efectuada apenas com sc-CO2, na segunda fracção a extracção foi efectuada com sc-CO2+10% de etanol e na terceira fracção extraiu-se utilizando a mesma composição de solvente durante mais 1 hora. A escolha dos parâmetros utilizados para este estudo teve como base trabalhos em curso no laboratório de acolhimento. Foi estudada a composição determinada a quantificação em polifenóis dos extractos obtidos recorrendo ao método de Folin-Ciocalteu. A capacidade antioxidante dos extractos foi avaliada através da capacidade de resgate do radical peroxilo e da capacidade de inibição da formação do radical hidroxilo. Foi identificado o álcool perilílico nos extractos recorrendo a cromatografia em camada fina. Os resultados obtidos com este trabalho são encorajadores e revelam que é possível obter extractos mais concentrados em compostos biofuncionais recorrendo à utilização da extracção supercrítica como um segundo passo de extracção. Os extractos preparados nesta etapa do projecto revelam-se concentrados no monoterpeno álcool perilílico, que possui bioactividade comprovada, e apresentam propriedades anti-proliferativas em linhas celulares humanas