Caracterização de dois novos tipos de centros ferro-enxofre em duas proteínas isoladas de bactérias redutoras de sulfato (desulfovibrio gigas NCIB 9332)

Tese apresentada para obtenção do grau de DoutorAs bactérias redutoras de sulfato têm uma cadeia de transferência electrónica complexa, que conduz à redução do sulfato através da oxidação de substâncias orgânicas ou de hidrogénio melecular. Isolaram-se e caracterizaram-se duas proteínas, isoladas de um organismo redutor de sulfato (Desulfovibrio gigas),contendo dois novos tipos de centros ferro-enxofre: a desulfore doxina, com um centro de lFe, semelhante ao da rubredoxina, e a ferredoxina II, com um centro [3Fe,x~ recentemente também identificado numa ferredoxina de Azotobacter vinelandii. A presença de ferro nestas proteínas permite a aplicação de técnicas espectroscópicas,de modo a que possa ser obtida informação estrutural(nomeadamente ressonância magnética nuclear (RMN), ressonância paramagnética electrónica (RPE) e espectroscopia de Môssbaueo. A desulforedoxina é um novo tipo de proteína contendo ferro nao hémico sem enxofre lábil. A proteína é isolada como um dímero, de peso molecular 7 900, consistindo de duas subunidades idênticas, com um átomo de ferro e quatro cisternas por monómero. A composição de ácidos aminados é invulgar, pois no total estão ausentes sete ácidos aminados (arginina, histidina, tripto fano, serina, prolina, isoleucina e fenilalanina). Determinou-se a sequência em ácidos aminados da desulfore doxina. A elucidação da sequência foi obtida por degradação da proteina inteira no sequenciador de proteínas e pela determinação da sequência dos peptídeos, obtida pela digestão com a protease de Staphylococus aureus