Estudo da actividade de lisinas codificadas por bacteriófagos que infectam Enterococcus sp

Dissertação apresentada para a obtenção do Grau de Mestre em Genética Molecular e Biomedicina, pela Universidade Nova de Lisboa, Faculdade de Ciências e TecnologiaAs endolisinas são proteínas codificadas no genoma de bacteriófagos de DNA de cadeia duplas. São produzidas na fase tardia do ciclo de vida lítico do fago e apresentam actividade hidrolítica ao nível do peptidoglicano, que permite a libertação da progenia viral. Quando aplicadas exogenamente, como proteínas recombinantes purificadas, a células bacterianas, as endolisinas podem degradar o peptidoglicano causando a lise rápida da célula. O potencial uso de endolisinas como agentes antibacterianos tem vindo a ser proposto como uma alternativa para combater o aumento significativo de espécies resistentes a antibióticos. O presente trabalho teve como principal objectivo o estudo da actividade lítica de duas lisinas produzidas pelos fagos F168 e F170, que infectam Enterococcus sp. A análise da sequência aminoacídica das lisinas Lis168 e Lis170 identificou a presença de um domínio CHAP e de um domínio amidase-2 nestas proteínas, respectivamente. Tendo por base esta informação, construiu-se um proteína quimera, Lis170-168 a fim de avaliar a sua actividade lítica comparativamente às lisinas Lis168 e Lis170 A estratégia adoptada resultou na produção de três amostras proteicas solúveis, que foram testadas sobre Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium e Enterococcus sp. Dos resultados obtidos concluiu-se que as lisinas Lis168, Lis170 e Lis170-168 são activas sobre espécies Enterococcus sp e que a Lis170-168 contribuiu para alargar o espectro de acção destas lisinas