Expression d'oncogènes et tumeurs mamaires : étude clinique et développement d'un modèle de souris transgéniques pour v-Ha-ras en toxicologie

We have investigated the expression of three oncogenes (c-erbB-2, ras, pS2) and one supressor tumor gene (p53) in first, a clinical study, second, in an experimental one using the v-Ha-ras transgenic mice. Quantification of copy number of c-erbB-2 oncogene has been obtained by gene amplification using non-radioactive amplimer labelling on 29 mammary ductal infiltrating carcinomas. There was an apparent correlation between gene copy number and tumor grade. Immunohistochemistry on the same lesions have shown c-Ha-ras and p53 expression in high grade lesions. pS2 expression was associated to low grade lesions, which confirms the good prognosis associated to this protein. Detection of oncogenes and encoded proteins may be of value for establishing a prognosis of mammary carcinomas. The v-Ha-ras transgenic mice have been used to evidence the carcinogenic potential of chemicals. Using non-radioactive labelling and detection methods (colorigenic and chemiluminescent), we have verified that these mice carried the ras transgene and expressed it in the hematopoietic organs (spleen and thymus) as well as in the kidney and the liver. We have found 2 or 3 copies of the transgene per genome-equivalent. 10 mmol/kg of 2-butoxyethanol administred over 2 weeks using osmotic minipumps have shown that this compound is devoided of epigenetic and genetoxic effects as measured by (i) methylation of total and v-Ha-ras gene DNA, (ii) absence of hydrophobic and hydrophilic DNA adducts. 2-butoxyethanol did not induced tumor formation in the transgenic mice. This animal model could be used as a screening test for possible carcinogenic chemicalsL'expression de trois oncogènes (c-erbB-2, ras, pS2) et d'un gène suppresseur de tumeur p53 a donné lieu à une étude de cas clinique et une étude expérimentale ayant utilisé les souris transgéniques v-Ha-ras. Une quantification du nombre de copies de l'oncogène c-erbB-2 a été obtenue par amplification génique associée à un marquage froid des amplimères à partir de 29 carcinomes infiltrants. Il semble exister une relation entre le nombre de copies du c-erbB-2 et le grade de la tumeur. Dans les mêmes lésions, l'immunohistochimie a montré que c-Ha-ras et p53 sont exprimés surtout dans les lésions de haut grade. En revanche, pS2 est exprimé surtout dans les lésions de faible grade, confirmant ainsi le pronostic favorable qui lui est associé. L'étude des oncogènes et des protéines correspondantes peut apporter des éléments pronostiques dans les cancers mammaires de la femme. Des souris transgéniques v-Ha-ras ont été utilisées pour mettre en évidence le potentiel cancérogène de produits chimiques. Des méthodes de marquage de sondes et de révélation non-radioactifs (colorimétrie et chimioluminescence) ont permis d'établir que ces souris portent le transgène ras et l'expriment dans les organes hématopoïétiques (rate et thymus) ainsi que dans le rein et le foie. Le transgène est présent à raison de 2 ou 3 copies par équivalent-génome. Nous avons montré ensuite que le 2-butoxyéthanol administré par mini-pompe osmotique pendant 15 jours (dose totale 10 mmol/kg), était dénué d'effets génotoxique et épigénétique mesures par (i) la méthylation de l’ADN total, (ii) la méthylation du transgène v-Ha-ras et (iii) l'absence de formation d'adduits hydrophobes et hydrophiles sur l’ADN. De plus, le 2-butoxyéthanol n'a pas induit la formation de tumeurs chez ces souris. Ce modèle d'animaux transgéniques pourrait être utilisé comme test de criblage de substances potentiellement cancérogène