Cloning, auto-induced expression by dual temperature controlling and characterization of lipase from Aurantiochytrium sp.PKU#SW7

[目的]克隆破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW7的脂肪酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源高效表达,并进行初步酶学性质研究.[方法]基于转录组数据注释,获得脂肪酶基因lip,构建重组基因工程菌Rosetta(DE3)/pET30-lip,利用双温控自诱导方法高效表达蛋白,表达产物(LIP)经Ni-Agarose His亲和层析柱纯化后进行酶学性质研究.[结果]从Aurantiochytrium sp.PKU#SW7中克隆得到一个大小为873 bp的脂肪酶基因(GenBank登录号为KT305964),该酶对p-NPB最适反应温度和pH分别为40℃和8.0.以不同浓度的金属离子Ca2+和Co2+溶液分别保温处理酶液30 min可使酶活提高1.3倍左右;甲醇对脂肪酶的抑制作用不明显.在最适反应条件下对p-NPP与p-NPB的酶活力分别为70.0±3.1 U/mg和102.5士2.6 U/mg.[结论]Aurantiochytrium sp.PKU#SW7脂肪酶具有良好的特性,符合生物柴油生物催化剂基本要求.海洋公益性行业科研专项经费项目,国家外国青年专家基金项目,中国博士后科学基金项目,深圳市海外高层次人才创新创业专项基金项目中文核心期刊要目总览(PKU)中国科技核心期刊(ISTIC)中国科学引文数据库(CSCD)61190-11984