Detection of peripheral follicular helper T cells in rheumatoid arthritis

目的:检测外周血滤泡辅助性T细胞(follicular T helper cells,Tfh cells)的比例及其表面标志,分析与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者疾病活动度的关系.方法:收集40例类风湿关节炎患者及20例正常对照组的外周血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)及血清,流式细胞术检测PBMC中CD4+ CXCR5+ Tfh细胞(CXCR5,趋化因子受体,C-X-C chemokine receptor type 5)的比例及其表面程序性细胞死亡1(programmed death-1,PD-1)、可诱导的协同刺激性因子(inducible co-stimulator,ICOS)、CD40配体(C040ligand,CD40L)及白介素21受体(interleukin-21 receptor,IL-21R)的表达情况,实时荧光定量PCR方法检测B细胞淋巴瘤石(B-cell lymphoma 6,Bcl-6)、白介素-21(interleukin-21,IL-21)及IL-21R的表达,酶联免疫吸附法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IL-21和B细胞趋化因子CXC配体13 (B cell-attracting chemokineCXC ligand 13,CXCL13)水平.结果:(1)流式细胞术结果提示,与正常对照组比较,RA患者组外周血CXCR5+CD4+ Tfh细胞表达与正常对照组相比明显升高(16.75±3.92vs.7.49±1.84,P＜0.001);低疾病活动度或缓解组RA外周血CXCR5+ CD4+Tfb细胞表达与正常对照组相比明显升高(16.62±3.43 vs.7.49±1.84,P＜0.001);中疾病活动度组RA外周血CXCR5+ CD4+Tfh细胞表达与正常对照组相比明显升高(16.82 ±3.07 vs.7.49±1.84,P ＜0.001);高疾病活动度组RA外周血CXCR5+ CD4+Tfh细胞表达与正常对照组相比明显升高(16.87±5.50vs.7.49±1.84,P＜0.001);RA患者外周血ICOS、PD-1、IL-21R在CD4+ CXCR5+细胞的表达与正常对照组相比显著升高(ICOS+ CXCR5+ CD4+细胞,8.37±4.28vs.3.72±1.81,P＜0.001;PD-1+ CXCR5+ CD4+细胞,1.57±1.10vs.0.24 ±0.30,P=0.035;IL-21R+ CXCR5+CD4+细胞,4.60 ±4.05 vs.0.20 ±0.19,P=0.006),而CD40L在CD4+ CXCR5+细胞的表达在两组间差异无统计学意义(3.38 ±3.71 vs.0.54±0.34,P=0.135).(2)RA患者组较正常对照组外周血中IL-21R mRNA升高(5.00 ±4.94 vs.0.74±0.55,P＜0.001),而转录因子Bcl-6 mRNA[4.54(3.33,7.23) vs.5.31(2.81,7.44),P=0.329]以及IL-21 mRNA [0.72(0.26,3.45)vs.0.56(0.27,3.71)P =0.195]表达差异无统计学意义(P ＞0.05);Bcl-6、IL-21和IL-21R nRNA的表达在不同组RA患者之间差异也无统计学意义(P＞0.05).(3)RA患者血清中IL-21、CXCL13水平明显高于正常对照组[IL-21,(200.49±154.56) ng/Lvs.(8.21±5.95) ng/L,P＜0.001;CXCL13,(43.09±1.28) ng/L vs.(93.72 ±49.72) ng/L,P＜0.001];相关分析显示IL-21、CXCL13浓度与RA疾病活动度正相关(r＞0.4),而血清类风湿因子(rheumatoid fae-tor,RF)和抗环瓜氨酸多肽抗体(anti-citrullinated protein antibody,anti-CCP)与RA疾病活动度无相关性(r＜0.2).结论:外周血Tfh细胞及其相关细胞因子在RA患者中显著升高,说明Tfh细胞可能参与RA的发病机制,阻断Tfb细胞的产生,有望成为治疗RA患者的新的作用靶点.国家重点基础研究发展计划(973计划,2010CB529103)资助 Supported by the Major State Basic Research Development Program of People's Republic of China中文核心期刊要目总览(PKU)中国科技核心期刊(ISTIC)中国科学引文数据库(CSCD)6951-9574