Pesquisa de mutações no gene inIA de Listeria monocytogenes

Mestrado em Biologia AplicadaListeria monocytogenes é uma bactéria patogénica de origem alimentar capaz de causar casos esporádicos e surtos de listeriose, uma doença invasiva severa. A proteína internalina A (InlA), codificada pelo gene inlA, tem um papel fundamental no processo de infeção, sendo necessária e suficiente para que L. monocytogenes ultrapasse a barreira intestinal e estabeleça uma infeção sistémica. Estudos sobre inlA de L. monocytogenes mostram que mutações que levam a codões stop prematuros ocorrem naturalmente e estão associadas a isolados com virulência atenuada. Foi sequenciado o gene inlA de onze isolados alimentares e onze isolados clínicos de L. monocytogenes recolhidos em Portugal com o objetivo de procurar mutações que levam ao aparecimento de codões stop prematuros, levando assim à produção de InlA truncada. Também foram testadas as eficiências de invasão de L. monocytogenes em linhas celulares Caco-2. Foram encontradas três tipos de mutações já descritas (6, 11 e 12), codificando uma proteína truncada com 492, 576 e 685 aminoácidos. Os codões stop prematuros foram identificados em quatro isolados alimentares e num isolado clínico. Os resultados obtidos indicam que os isolados com codão stop prematuro no gene inlA revelam uma eficiência de invasão atenuada em células Caco-2.Listeria monocytogenes is a food-borne pathogen capable of causing listeriosis, a severe invasive disease and responsible for some outbreaks that occur occasionally. Internalin A protein (InlA) encoded by inlA gene has a key role in the infection mechanism, being necessary for L. monocytogenes to cross the intestinal barrier and to establish a systemic infection. Studies on inlA in L. monocytogenes have shown that mutations leading to premature stop codons (PMSC) occur naturally and are associated with attenuated virulence of this bacterium. inlA from eleven food and eleven clinical isolates of L. monocytogenes from Portugal, were sequenced to find mutations carrying PMSC leading to production of a truncated and secreted InlA. The invasion efficiencies of these strains of L. monocytogenes of the Caco-2 cell line were also tested. It was found three mutation types, previously described (6, 11 and 12), leading to a predict truncated InlA of 492, 576 and 685 amino acids. The PMSCs were detected in four food and in one clinical isolates. The results show a reduced invasiveness, in Caco-2 cell line, of isolates with PMSCs in inlA