Subtipos funcionais de células T em esclerose sistémica

Mestrado em Bioquímica - Bioquímica ClínicaA Esclerose Sistémica é uma doença reumática autoimune do tecido conjuntivo, caracterizada por anormalidades do sistema vascular e imune, que levam à fibrose da pele e órgãos internos. A fisiopatologia desta doença é ainda desconhecida. Contudo existe a hipótese de que os linfócitos Th17/Tc17 e que as células que se caracterizam pela expressão de CXCR5 estejam de algum modo envolvidas nesta doença, pelo facto de elas terem um papel importante em outras doenças autoimunes. Deste modo, o presente trabalho teve com objetivo quantificar e caracterizar funcionalmente as células Th(c)17, Th(c)1 e os subtipos Th17 CXCR5+ e Th1 CXCR5+ no sangue periférico de doentes com Esclerose Sistémica. Para tal, o sangue periférico de 43 doentes com Esclerose Sistémica e de 20 pessoas saudáveis foi colhido e os linfócitos T foram inicialmente estimulados in vitro para se quantificar a produção das suas citocinas. Seguiu-se um protocolo de permeabilização intracitoplasmática de forma a se analisar separadamente a expressão intracelular das citocinas IL-17, IL-2, TNF-α e IFN-γ nas diferentes subpopulações de linfócitos em estudo. Os doentes com Esclerose Sistémica foram divididos consoante o subtipo da doença e consoante o tempo de duração da doença desde o diagnóstico. Os resultados obtidos demonstraram que não existiam diferenças na frequência de células Th17 e Tc17 entre os grupos estudados. No entanto, a frequência destas células a produzir IL-2 e TNFα é maior nos doentes com Esclerose Sistémica. Para além disso verificou-se que com aumento da duração da doença em estudo, há um aumento da frequência das células Th1 e Tc1 a produzir TNFα e IFNγ. Verificouse ainda que a frequência dos subtipos Th1 CXCR5+ a produzir as citocinas IL-2 e TNFα parece distinguir os dois subtipos de Esclerose Sistémica. Os resultados obtidos neste trabalho sugerem que as células Th17 e as células Th1 estão, do ponto de vista funcional, alteradas em SSc, o que aponta para o seu envolvimento na fisiopatologia e/ou progressão da doença.Systemic Sclerosis is an autoimmune rheumatic disease of the connective tissue, characterized by vascular and immune system abnormalities, leading to fibrosis of the skin and internal organs. The pathophysiology of this disease is still unknown. However there is a hypothesis that Th17 and Tc17 lymphocytes and cells that are characterized by expression of CXCR5 are somehow involved in this disease since they have an important role in other autoimmune diseases. Thus, the present study aimed to quantify and functionally characterize Th(c)17 and Th(c)1 cells and Th17 CXCR5+ and Th1 CXCR5+ subtypes in peripheral blood of patients with Systemic Sclerosis. To this end, peripheral blood from 43 patients with Systemic Sclerosis and 20 healthy individuals was collected and T lymphocytes were stimulated in vitro to quantify their cytokine production. This was followed by an intracytoplasmic permeabilization protocol in order to separately analyze the intracellular expression of IL-17, IL-2, TNF-α and IFN-γ in the different T cell subpopulations in analysis. Patients with Systemic Sclerosis were divided depending on the disease subtype and the disease duration since diagnosis. The results showed that there were no differences in the frequency of Th17 and Tc17 cells between groups. However, the frequency of these cells producing IL-2 and TNFα is greater in patients with systemic sclerosis. Furthermore it was found an increase frequency of TNFα- and IFNγ-producing Th1 and Tc1 cells, with the increasing duration of disease. It was further found that the frequency of CXCR5 + Th1 subtypes producing IL-2 and TNFα cytokines can distinguish the two subtypes of systemic sclerosis. The present results suggest that Th17 cells and Th1 cells are at the functional point of view altered in SSc, which points to their involvement in the pathophysiology and/or disease progression