6#215;His tag与β-半乳糖苷酶融合标记技术在IGF-Ⅰ检测中的应用研究

  • 黄勇
Publication date
January 2007

Abstract

人胰岛素样生长因子-I(IGF-I)是一种重要的多肽类激素,在生长激素(GH)-IGF轴的内分泌调节系统中发挥着关键性的作用。由于IGF-I与GH被认为可以增加肌肉力量,近年来成为竞技体育中某些运动员为提高比赛成绩的滥用药物之一。虽然GH与IGF-I都被国际反兴奋剂组织(World Anti-Doping Agency,WADA)列为违禁药物,但由于迄今尚未确立世界公认的检测GH或IGF-I滥用的分析方法,对相关法规的有效执行造成了严重的制约。血液中的IGF-I受到GH的调控,故其水平能够用于间接指示GH的摄入量。同时,人体内IGF-I的水平出现异常还与多种疾病相关,因此,开发灵敏、可靠、实用性强的血清IGF-I的检测技术不仅可在兴奋剂检测领域发挥重要的作用,也有利于提高相关疾病的临床诊断水平。 本论文首先探索和建立了利用六聚组氨酸作为标记物的新型IGF-I免疫检测方法。利用基因工程技术,通过克隆、表达、纯化与复性等过程,分别获得了IGF-I与六聚组氨酸标签(6×His tag)的两种融合蛋白,即IGF-I-6H和16H-IGF-I-6H。利用表面等离子体共振(SPR)技术研究了二者与IGF结合蛋白、抗IGF-I抗体、抗6H抗体之间的结合动力学过程。实验结果表明,两种融合蛋白的免疫反应性与生物学活性均得到保持。基于这两种6×His tag融合蛋白,建立了三种IGF-I的酶联免疫吸附分析(ELISA)模式。这三种模式的检测限在10-40 nmol/L之间,人血清中的加标回收率在92-107%之间。其中,制备6×His tag与目标分析物的融合蛋白,结合使用酶标抗6H抗体作为指示剂的夹心竞争EL...

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