c-Src抑制对乳腺癌细胞的影响机制研究

乳腺癌是一种严重威胁妇女健康的恶性肿瘤。乳腺癌的治疗注重以手术治疗为主,辅助以化学治疗、内分泌治疗、放射线治疗、生物治疗等多种方法综合治疗。但足这些治疗手段都会给患者带来一定的副作用,影响患者生活质量。开发新的治疗靶点以及研究新的靶向治疗手段仍然是乳腺癌治疗的主要方向。C-Src是一个60 kDa的非受体酪氨酸激酶,它自身没有致癌性,但其磷酸化能激活下游靶分子从而调控细胞生长、增殖、粘附、迁移等过程,因而c-Src可能成为癌症治疗的靶分子。<br> 本研究利用小分子抑制剂PP2和c-Src基因沉默验证c-Src抑制对乳腺癌细胞生长、迁移、细胞周期以及细胞凋亡等多方而的影响。PP2或siRNA抑制c-Src后,抑制了乳腺癌细胞的迁移过程并逆转高转移性癌细胞的问充质样细胞表型RT-PCR和Western blot进一步验证了细胞表型相关标志物的变化,而这些变化可能足通过影响转录因子Snail,Slug,Twist的表达引起的。PP2处理细胞后引起时间依赖的抑制效果,处理30h后约30％MCF-7细胞凋亡。PP2处理MCF-7细胞一个周期时间后使用双向电泳和质潜方法,本文鉴定出十三个显著差异表达的蛋白,对其中的两个:烯酰辅酶A水化酶短链1(enoy-CoA hydratase short chain1,ECHS1)和过氧化还原酶3(peroxiredoxin3,PRDX3)做了进一步的研究。RT-PCR和Western blot验证了PP2处理后ECHS1和PRDX3转录水平和蛋白水平的降低。RNA干扰使ECHS1和PRDX3沉默以及ECHS1和PRDX3的过表达进一步验证了ECHS1和PRDX3在PP2处理引起的MCF-7细胞凋亡中的重要作用。另外,本研究还观察到c-Src----抑制参与调节MCF-7的细胞周期蛋白表达,Western blot证明了PP2处理或c-Src沉默后cyclin D1和cyclin E的下调以及p27Kip1上调；c-Src抑制后ERK1/2,AKT,GSK3β磷酸化减少,使用MEK1/2/ERK1/2和PI3K/AKT通路的抑制剂处理进一步证明,c-Src抑制是通过抑制AKT/GSK3β和ERK1/2信号通路调节G1期相关蛋白cyclin D1,cyclin E和p27 Kip1的表达。<br> 本研究证明了在乳腺癌细胞中PP2处理引起的凋亡可能是通过下调ECHS1和PRDX3从而起始线粒体介导的凋亡通路,ECHS1和PRDX3的变化可能是癌细胞对于PP2或其它促凋亡分了的直接反应,c-Src抑制可能参与调节细胞周期蛋白的表达并对转移性乳腺痛细胞上皮-间质转化过程起关键作用。