4小鼠FAM3C基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的：构建并鉴定小鼠FAM3C人的重组腺病毒pAd-FAM3C表达载体,为进一步研究FAM3C功能奠定基础.方法：分离正常小鼠肝脏、脾脏,提取总RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增FAM3C基因,将其克隆到T3载体上,再含有绿色荧光蛋白(GFP)标记的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV后,再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdTrack-CMV-pEASY-T3-FAM3C,转染HEK293T细胞包装病毒.荧光显微镜下观察细胞内绿色荧光,测定病毒效价,Western blot分别分析细胞内FAM3C蛋白质的表达.结果：经双酶切及基因鉴定,重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见约700bp插入片段,测序结果和GenBank中的基因序列一致.重组病毒效价为2.8×108 pfu/mL；重组病毒感染后,HEK293T细胞中有FAM3C蛋白质有表达.结论：成功构建FAM3C重组腺病毒载体,并可在HEK293T细胞中表达,为进一步研究FAM3C的功能奠定了基础.