Explore to Assay the Adsorbing Percentage of Therapeutic Hepatitis B Vaccine Major Effective Component to Alum Adjuvant

目的:探索免疫复合物型治疗性乙型肝炎疫苗"乙克"的主要有效成份HBsAg/抗-HBs复合物(IC)及游离HBsAg的佐剂吸附率检测方法.方法:氢氧化铝佐剂经不同转速离心后,用ICP-AES法检测上清中铝残留量.未吸附IC经不同转速离心后,用电化学发光法检测在各离心转速下上清中HBsAg和抗-HBs含量.用电化学发光法检测未吸附IC与同一批次的佐剂吸附IC的HBsAg含量,计算HBsAg回收率;检测佐剂吸附IC样品离心上清及未离心样品的HBsAg含量,计算吸附百分率及检测的精密度.用凯氏定氮法测定佐剂吸附免疫复合物离心上清与离心前样品蛋白含量.结果:氢氧化铝佐剂经6500 r/min离心3 min,上清中铝的残留量为0;未吸附IC经2000-9000 r/min离心3 min,所测上清中HBsAg与抗-HBs均未明显下降.佐剂吸附IC经解离后,HBsAg回收率为91.56%,表明经过解离后铝佐剂不会影响HBsAg含量的检测结果.佐剂吸附IC样品与离心上清比较,蛋白含量减少了3.2 mg/mL,表明每毫克铝可吸附约2.54 mg蛋白,对总蛋白的吸附率为13.5%.佐剂吸附IC及HBsAg的吸附百分率的重复性检测结果为99.87%±0.15%,CV为0.15%.结论:佐剂吸附的IC在6500 r/min离心3 min的条件下,上清中未被吸附的HBsAg和抗-HBs不会下沉,而氢氧化铝佐剂连同被吸附IC及HBsAg则被沉淀,且铝佐剂不会对HBsAg的测定造成干扰,故通过检测离心样品上清及未离心样品中的HBsAg含量,可有效测定铝吸附百分率,且精密度较好.国家重大科技专项项目中国科技核心期刊(ISTIC)0143-462