Construction and detection of the expression vector with human costimulatory molecules B7-H3

目的:B7-H3作为B7家族的最新成员,其受体在活化的T细胞表面可被诱导表达,B7-H3对CD4+和CD8+细胞的生成均具有增加作用,并可选择性增加IFN-γ的生成.为将B7-H3基因转染入舌鳞癌细胞Tca8113中制备瘤苗,克隆人共刺激分子B7-H3基因,构建其真核表达载体,并检测B7-H3基因在Tca8113中的表达.方法:从淋巴细胞中提取RNA,用RT-PCR方法将B7-H3的编码序列cDNA扩增.然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP-C1中,构建成最终的表达载体pEGFP-C1-B7-H3.运用脂质体方法将pEGFP-C1-B7-H3转染Tca8113细胞,转染24h后,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR检测B7-H3在该细胞中的表达.结果:从淋巴细胞中提取的RNA质量较好,经RT-PCR扩增出目的基因B7-H3,其全长大小为951bp.测序鉴定,该序列与GenBank中序列相同.转染pEGFP-C1-B7-H3载体的靶细胞Tca8113中,荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白,RT-PCR方法检测到目的基因B7-H3的一个215bp大小的cDNA扩增产物.结论:酶切及RT-PCR证实成功构建人B7-H3的真核表达载体pEGFP-C1-B7-H3,将该载体转染到Tca8113中,RT-PCR鉴定B7-H3基因在该细胞中表达.广东省深圳市科技局科研项目05356-360