Change of osteopontin expression in the calcification of rat vascular smooth muscle cells induced by high phosphate and highcalcium media

目的 观察大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)在高钙、高磷条件下骨桥蛋白(OPN)表达的动态变化及其分布特点,探讨其与血管钙化的关系. 方法 应用大鼠原代VSMCs进行体外实验,细胞生长至80%融合后更换不同培养基进行培养.根据培养基中钙磷浓度不同分为3组:对照组、高钙组和高磷组.更换培养基当天定义为DO.应用原子分光光度计检测细胞内钙含量.应用免疫组化染色观察各组第3、6、10和17天OPN的在细胞中的表达;同时收集第4、8、12天各组细胞,提取总蛋白,Western blot方法 检测OPN表达.最后应用电镜、免疫电镜观察OPN在VSMCs的分布.结果 对照组未观察到钙盐沉积,VSMCs钙含量在10天内无明显变化,高钙组VSMCs钙含量D2有明显增加,D8、D10进一步增加;高磷组钙含量D8、D10明显增加,与D0比较差异均有显著性(P＜0.01).在DO-D10,高钙组、高磷组VSMCsOPN的表达逐渐增强.但这以后,无论是D12 Western blot结果,还是D17免疫组化结果均显示OPN表达下调.对照组OPN表达一直很弱,且随时间变化无明显性.D1O高钙组和高磷组VSMCs在电镜下可见细胞外基质沉积,为丰富的胶原纤维,其问可见直径100～200nm的小泡.高密度电子致密物主要呈颗粒样沿胶原纤维沉积;也可见于小泡的泡壁.免疫电镜显示,高钙组和高磷组VSMCs胞浆中均可见较多与OPN相结合的胶体金颗粒,而在细胞外基质中仅偶见.结论 大鼠VSMCs在高钙和高磷条件下培养发生钙化过程中, OPN表达呈先增强再减弱的变化;对照组OPN的表达一直在一个很低的水平.免疫电镜显示OPN主要表达于细胞胞浆中,细胞外基质分布很少.中国科技核心期刊(ISTIC)05267-271