目的:提高Klenow酶的热稳定性和储藏稳定性.方法:利用PCR的方法扩增DH5α染色体DNA,构建编码Klenow和人血清白蛋白第三功能区(HSA-D3)的融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.分别对Klenow酶和Klenow-HSA融合蛋白进行纯化,并进行活性及稳定性的研究.结果:发现Klenow-HSA融合蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达.体外实验证实这种融合蛋白具有与Klenow聚合酶相同的活性,其稳定性明显提高.结论:融合蛋白确实能增加Klenow酶的热稳定性和储存稳定性,为研制新一代高稳定性Klenow酶提供了基础.中国科学引文数据库(CSCD)06684-6873
目的:构建人Cdc25C基因原核表达载体,获得纯化的GST-Cdc25C融合蛋白,并对其功能进行初步检测.方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Cdc25C基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重...
目的 在大肠杆菌中高效表达组氨酸标签与人β干扰素融合蛋白,并进行蛋白纯化和生物活性测定.方法 提取人Bel-7402细胞总DNA为模板,经PCR获得人β干扰素编码基因片段.将此基因插入表达载体pET-...
Nagakubo等[1]在1997年发现并报道了DJ-1之后,人们研究发现DJ-1基因突变与帕金森病(Parkinsons disease,PD)相关[2],此外,DJ-1还具有转录调控、抗氧化应激...
将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一...
目的:从原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中克隆Cox7a2基因,构建Pgex4t-1-Cox7a2载体,表达和鉴定重组蛋白.方法:应用RT-PCR方法从原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中克隆Cox...
文章通过特异的引物分别扩增出CTLA-4和FasL胞外区的cDNA,将它们拼接后,克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)中,进行表达、纯化,获得CTLA-4-FasL融合蛋白.Western blo...
目的构建重组DT/bFGF融合蛋白表达载体,制备高纯度的DLF融合毒素.方法PCR扩增DT389和bFGF的编码DNA序列,经酶切和连接,克隆至表达载体pET-30a,转化E.coli BL21(DE...
人转铁蛋白（TF）是一个能够结合铁的单体糖蛋白，主要生理功能为结合、运输三价铁离子,控制体液中游离铁离子浓度，提供可利用的铁和防止铁在血液中的沉积。成熟的转铁蛋白由679个氨基酸组成，分子量约80kD...
目的对融合基因GM-CSF/Fcγ2进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM-CSF/Fcγ2-融合蛋白真核表达载体.方法通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM-CSF/Fcγ2-...
应用PCR技术获得肿瘤相关抗原HCA520编码基因,构建至pGEM-T Easy载体,测序正确后,亚克隆至pEGFP-N1载体,1%的琼脂糖电泳得到两条带,与预期结果相同;鉴定正确的基因一过性转染至C...
目的:分析半胱氨酸对变性pS2融合蛋白复性的影响.方法:经半胱氨酸处理与不处理的纯化pS2融合蛋白与抗 pS2多抗血清及进口pS2单抗于37 ℃孵育1 h后,再进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫...
虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ基因通过PCR扩增,插入pMAL-p2X载体,基因5'端插入凝血酶切割位点.在大肠杆菌中经IPTG诱导高效分泌表达.表达产物N端含麦芽糖结合蛋白,融合蛋白被分泌到大肠杆...
本发明涉及一种来源于单环刺螠的胰凝乳蛋白酶抑制剂及其基因和其重组蛋白的应用，属于生物医学领域。该胰凝乳蛋白酶抑制剂的蛋白质具有氨基酸序列SEQ?ID?No.1，编码的单环刺螠胰凝乳蛋白酶抑制剂UCI0...
PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一.以pSK-PPF1为模板,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段,称为PPFC.进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM-T-easy,再酶切...
人源STK3蛋白(serine/threonine-protein kinase 3)是一种促凋亡激酶,能与多种肿瘤相关蛋白相互作用,主要功能为应激活化,能入核介导染色质凝集,导致核小体间DNA碎片化...
目的:构建人Cdc25C基因原核表达载体,获得纯化的GST-Cdc25C融合蛋白,并对其功能进行初步检测.方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Cdc25C基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重...
目的 在大肠杆菌中高效表达组氨酸标签与人β干扰素融合蛋白,并进行蛋白纯化和生物活性测定.方法 提取人Bel-7402细胞总DNA为模板,经PCR获得人β干扰素编码基因片段.将此基因插入表达载体pET-...
Nagakubo等[1]在1997年发现并报道了DJ-1之后,人们研究发现DJ-1基因突变与帕金森病(Parkinsons disease,PD)相关[2],此外,DJ-1还具有转录调控、抗氧化应激...
将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一...
目的:从原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中克隆Cox7a2基因,构建Pgex4t-1-Cox7a2载体,表达和鉴定重组蛋白.方法:应用RT-PCR方法从原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中克隆Cox...
文章通过特异的引物分别扩增出CTLA-4和FasL胞外区的cDNA,将它们拼接后,克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+)中,进行表达、纯化,获得CTLA-4-FasL融合蛋白.Western blo...
目的构建重组DT/bFGF融合蛋白表达载体,制备高纯度的DLF融合毒素.方法PCR扩增DT389和bFGF的编码DNA序列,经酶切和连接,克隆至表达载体pET-30a,转化E.coli BL21(DE...
人转铁蛋白（TF）是一个能够结合铁的单体糖蛋白，主要生理功能为结合、运输三价铁离子,控制体液中游离铁离子浓度，提供可利用的铁和防止铁在血液中的沉积。成熟的转铁蛋白由679个氨基酸组成，分子量约80kD...
目的对融合基因GM-CSF/Fcγ2进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM-CSF/Fcγ2-融合蛋白真核表达载体.方法通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM-CSF/Fcγ2-...
应用PCR技术获得肿瘤相关抗原HCA520编码基因,构建至pGEM-T Easy载体,测序正确后,亚克隆至pEGFP-N1载体,1%的琼脂糖电泳得到两条带,与预期结果相同;鉴定正确的基因一过性转染至C...
目的:分析半胱氨酸对变性pS2融合蛋白复性的影响.方法:经半胱氨酸处理与不处理的纯化pS2融合蛋白与抗 pS2多抗血清及进口pS2单抗于37 ℃孵育1 h后,再进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫...
虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ基因通过PCR扩增,插入pMAL-p2X载体,基因5'端插入凝血酶切割位点.在大肠杆菌中经IPTG诱导高效分泌表达.表达产物N端含麦芽糖结合蛋白,融合蛋白被分泌到大肠杆...
本发明涉及一种来源于单环刺螠的胰凝乳蛋白酶抑制剂及其基因和其重组蛋白的应用，属于生物医学领域。该胰凝乳蛋白酶抑制剂的蛋白质具有氨基酸序列SEQ?ID?No.1，编码的单环刺螠胰凝乳蛋白酶抑制剂UCI0...
PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一.以pSK-PPF1为模板,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段,称为PPFC.进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM-T-easy,再酶切...
人源STK3蛋白(serine/threonine-protein kinase 3)是一种促凋亡激酶,能与多种肿瘤相关蛋白相互作用,主要功能为应激活化,能入核介导染色质凝集,导致核小体间DNA碎片化...
目的:构建人Cdc25C基因原核表达载体,获得纯化的GST-Cdc25C融合蛋白,并对其功能进行初步检测.方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Cdc25C基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重...
目的 在大肠杆菌中高效表达组氨酸标签与人β干扰素融合蛋白,并进行蛋白纯化和生物活性测定.方法 提取人Bel-7402细胞总DNA为模板,经PCR获得人β干扰素编码基因片段.将此基因插入表达载体pET-...
Nagakubo等[1]在1997年发现并报道了DJ-1之后,人们研究发现DJ-1基因突变与帕金森病(Parkinsons disease,PD)相关[2],此外,DJ-1还具有转录调控、抗氧化应激...
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