Specific Immune Response Against Hepatocellular Carcinoma by Secondary Lymphoid Tissue Chemokine Transfected Dendritic Cells

[目的]构建携带次级淋巴组织趋化因子(SLC)基因的重组腺相关病毒载体并转染肝癌患者外周血来源的树突状细胞(DC),探讨其对肝癌细胞特异性的免疫作用.[方法]采用 PCR法扩增出SLC基因,将SLC基因片段克隆至腺相关病毒PAG-AAV载体上,GFP作为成功转染的示踪蛋白.经HEK 293T细胞的包装扩增后得到携带SLC基因的重组腺相关病毒体外转然DC,制备AAV-SLC-DC疫苗,流式细胞仪检测感染率,免疫荧光、RT-PCR法检测SLC表达.并以MTT法检测DC刺激T淋巴细胞增殖能力(MLR)及对肝癌细胞株HepG2的CTL效应.[结果]成功得到SLC基因,并将SLC基因片段克隆至PAG-AAV载体上,可检测到序列正确的SLC基因的正确表达,经HEK 293T细胞包装出病毒颗粒;测定病毒滴度为6.3×10μg/ml.重组腺相关病毒PAG-AAV-SLC体外感染DC,流式细胞仪检测感染率达48.37%.SLC基因转染不影响DC的表型表达,与对照组无显著差异(P＞0.05);转染后DC较对照组有较强的刺激T淋巴细胞增殖的能力;并可诱导出特异性的CTL效应,不同效靶比与对照组相比均有显著差异(P＜0.05).[结论]构建的重组SLC腺相关病毒可将SLC基因导入树突状细胞(DC)内并正确表达,并可诱导出对肝癌细胞特异性的CTL效应,为进一步研究SLC基因修饰的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用提供了实验基础.上海市自然科学基金; 南京军区卫生科研基金项中国科技核心期刊(ISTIC)010838-8431