Construction and Expression of SNAP25 Gene Mediated by Recombinant Adenovirus

利用RT-PCR法,从人胰腺组织扩增出SNAP25基因,定向克隆至pENTR-TOPO载体获得重组质粒pENTR/D-TOPO-SNAP25.经PCR及测序验证其阅读框正确.再与腺病毒载体pAD/CMV/V5-DEST 发生LR重组反应,SNAP25取代pAD/CMV/V5-DESTTM中的ccdB-CmR基因,获得重组腺病毒载体pAD/CMV/V5-DEST-SNAP25(pAD- SNAP25).重组腺病毒载体经Pac I酶切,脂质体法转染HEK-293A细胞.以鼠抗人SNAP25单克隆抗体为一抗,做荧光及Western blot检测,结果表明重组腺病毒pAD-SNAP25在HEK-293A细胞中包装成功.重组腺病毒pAD-SNAP25感染大鼠胰岛,结果表明在高糖浓度下,外源性SNAP25蛋白的表达促进了大鼠胰岛素分泌.国家自然科学基金; 人事部留学回国人员科技活动择优课题; 北京市优秀人才专项资助D类项目; 教育部高等学校博士学科点专项科研基金中文核心期刊要目总览(PKU)中国科技核心期刊(ISTIC)中国科学引文数据库(CSCD)01018-222