Construction of adenoviral vector encoding human VEGF121 cDNA and its expression in vitro

目的构建人VEGF121 腺病毒表达载体,探讨应用血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因治疗骨科缺血性疾患的可行性. 方法采用分子克隆技术,从pCDI/VEGF121质粒获得hVEGF121cDNA,经穿梭质粒pShuttle克隆到腺病毒质粒上,构成Adeno-VEGF121腺病毒重组质粒,经酶切及测序鉴定正确后,包装成为重组Adeno-VEGF121腺病毒,并进行电镜观察及滴度测定.用病毒感染小鼠骨髓基质细胞,用逆转录PCR方法检测VEGF121 基因在骨髓基质细胞中的转录,用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达. 结果经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,电镜显示包装细胞中有病毒存在,包装的病毒滴度为8×1010 pfu/ml,RT-PCR证实有VEGF121 mRNA的转录,免疫印迹及免疫组化检测有VEGF121蛋白的表达,而对照未见VEGF121转录和表达. 结论构建的VEGF121腺病毒表达载体可在体外表达,VEGF基因治疗有可能用于骨科缺血性疾患.国家自然科学基金中文核心期刊要目总览(PKU)中国科学引文数据库(CSCD)05379-3824