Amplification of full-length cDNA gene of human bone morphogenetic protein-2 and construction of its eukaryotic expression vector with nested reverse transcription-polymerase chain reaction

目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统.方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成.提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1 188 bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以HindⅢ和XbaⅠ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统.结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1 188 bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符.将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统.结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础.中国科技核心期刊(ISTIC)中国科学引文数据库(CSCD)0142702-27041