目的 获得可溶、稳定、高纯度的α1-微球蛋白(α1-microglobulin,α1-MG),为临床检测标准品、质控品制备奠定基础.方法 制备构建重组人毕赤酵母真核分泌表达质粒,并对重组α1-MG进行诱导表达、纯化和鉴定.应用PCR方法扩增重组人α1-MG pET-15b质粒,得到N端带有6个组氨酸"标签"(6 × His-tag)的α1-MG融合基因,将该基因插入到真核酵母分泌表达质粒pPIC9中,筛选得到正确序列的重组分泌表达质粒pPIC9-MG、并转化毕赤酵母菌菌株GS115(Pichia pastoris GS115);用甲醇进行重组人α1-MG的诱导表达,摇瓶发酵,上清α1-MG含量测定;目的蛋白采用硫酸铵沉淀、一步亲和层析纯化并通过免疫学含量测定、PAGE电泳、Western blot以及生物质谱进行鉴定;初步进行稳定性观察.结果 成功构建了重组人α1-MG真核酵母表达载体,核酸测序与预测一致,并在毕赤酵母中实现了重组人α1-MG的分泌性表达,表达量可达73 mg/L,约占总蛋白的30%.经纯化及鉴定,得到了可溶性的、具有天然蛋白生物学活性的PAGE纯目的蛋白.结论 首次在毕赤酵母中实现重组人α1-MG的高效分泌性表达,表达目的蛋白具有良好的生物学活性、稳定性好、易纯化等优点.中文核心期刊要目总览(PKU)中国科学引文数据库(CSCD)08736-7392
掌叶半夏凝集素(Pinellia pedatisecta Agglutinin,PPA)基因属于单子叶甘露糖结合凝集素家族,具有抗虫活性。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从掌叶半夏幼叶中克...
目的:构建变形链球菌comE基因原核表达载体,诱导ComE 融合蛋白高效表达,获取高质量的ComE 融合蛋白.方法:提取变形链球菌基因组,PCR 扩增得到变形链球菌comE基因片段,BamH Ⅰ和Xh...
目的:初步探讨Alport综合征患儿血清可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)的水平及其临床意义. 方法:入选34例Alport综合征患儿,11例原发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患儿疾病...
α<,1>微球蛋白(α<,1>-Microglobulin,α<,1&gt...
目的:构建人β2-microglobulin(β2-M)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中高效表达β2-M蛋白质并进行纯化,为构建MHC-肽四聚体奠定基础.方法:从人外周血单核细胞中提取总RNA,采用R...
目的:构建人胰腺α-淀粉酶(HPA)真核表达载体并在毕赤酵母中进行表达.方法:从人胰腺组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,RT-PCR法扩增HPA基因,将其插入到酵母分泌性表达质粒pPIC9中,筛选...
目的 在大肠杆菌中高效表达组氨酸标签与人β干扰素融合蛋白,并进行蛋白纯化和生物活性测定.方法 提取人Bel-7402细胞总DNA为模板,经PCR获得人β干扰素编码基因片段.将此基因插入表达载体pET-...
目的:研究过氧化脂质体增殖激活受体γ(PPAR-γ)在人肾小球肾炎病变活动时肾组织中的表达变化.方法:根据临床及肾活检病理诊断,选择炎症病变明显活动的病人,细胞性新月体肾小球肾炎(RPGN)17例、狼...
目的 探讨治疗半侧颜面发育不全畸形的各种正颌外科与其他手术方法组合,为提高治疗这种畸形的效果提供临床参考.方法 根据 11例半侧颜面发育不全患者的畸形程度,分别采用上颌LeFort Ⅰ型截骨术,下颌升...
目的 研究微囊化重组腺病毒AdCMV/Bcl-2转染对缺血再灌注损伤肠黏膜的保护作用及其机制.方法 利用气体雾化技术将携带Bcl-2 基因的复制缺陷型重组腺病毒AdCMV/Bcl-2微囊化,检测其在人...
微小変化型ネフローゼ症候群(minimal change nephrotic syndrome : MCNS)は糸球体上皮細胞(ポドサイト)の機能異常により発症すると考えられているが, その発症機序の...
目的构建表达人α1-微球蛋白(α1-microglobulin,α1-MG)的重组质粒并纯化目的蛋白.方法从正常人肝脏中提取cDNA,RT-PCR扩增α1-mg基因,将扩增产物用NdeⅠ/BamHⅠ消...
目的:观察海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊对囊内细胞的存活、生长及凋亡的影响,以验证免疫隔离APA微胶囊的生物膜性和生物活性.方法: 实验于2004-01/05在华中科技大学同济医学院附属同...
目的:分离纯化抗肾小球基底膜(GBM)抗体的特异性靶抗原,并评价其在抗GBM抗体检测中的应用价值.方法:通过孔径不同的筛网从牛肾脏中提取牛肾小球,采用改良的40 g*L-1去氧胆酸钠破坏肾小球细胞而获...
背景与目的:在肿瘤细胞中Fas蛋白的表达是研究治疗肿瘤及判断愈后的重要基础,本研究检测Fas在泌尿生殖系统恶性肿瘤细胞系中的表达情况.方法:采用流式细胞直接免疫荧光法、Westernblot和Nort...
掌叶半夏凝集素(Pinellia pedatisecta Agglutinin,PPA)基因属于单子叶甘露糖结合凝集素家族,具有抗虫活性。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从掌叶半夏幼叶中克...
目的:构建变形链球菌comE基因原核表达载体,诱导ComE 融合蛋白高效表达,获取高质量的ComE 融合蛋白.方法:提取变形链球菌基因组,PCR 扩增得到变形链球菌comE基因片段,BamH Ⅰ和Xh...
目的:初步探讨Alport综合征患儿血清可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)的水平及其临床意义. 方法:入选34例Alport综合征患儿,11例原发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)患儿疾病...
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目的:分离纯化抗肾小球基底膜(GBM)抗体的特异性靶抗原,并评价其在抗GBM抗体检测中的应用价值.方法:通过孔径不同的筛网从牛肾脏中提取牛肾小球,采用改良的40 g*L-1去氧胆酸钠破坏肾小球细胞而获...
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