Construction and Identification of Recombinant Vectors Carrying Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase Genes Expressed in Vascular Endothelial Cells

背景与目的:阻断肿瘤组织内血管生成和血管化是一个很有发展前景的灭瘤途径之一.胸苷激酶自杀基因系统(herpes simplex virus-thymidinekinase,HSV-tk/GCV)能有效杀伤血管内皮细胞,目前多采用巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)作为启动子,但其杀伤缺乏特异性.KDR(kinase domaininsert containing receptor)是血管内皮生长因子的两种受体之一,它在肿瘤血管内皮细胞中高表达,而在正常组织中呈低表达.本研究是构建KDR启动子介导的HSV-tk重组腺病毒、并对其内皮细胞特异性表达作用进行分析.方法:采用pAdeasy系统,按定向克隆方法将KDR-tk片段正向插入表达载体的多克隆位点间,构建受KDR启动子调控并可表达HSV-tk基因的AdKDR-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外感染人脐静脉血管内皮细胞系(human umbilical venousendothelial cells,HUVEC)和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2.用更昔洛韦(ganciclovir,GCV)处理受染细胞,并以MTF法检测其细胞增殖情况.结果:经限制性酶切分析,RT-PCR及PCR方法鉴定,插入基因大小、位置、方向正确.病毒滴度为1 ×1010 pfu/ml.在感染复数(multiplicity of infection,MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50 μg/ml时,感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞存活率由100%分别下降至(28.94±5.67)%和(75.45±2.91)%(P＜0.01).结论:构建的含KDR-tk重组腺病毒可在血管内皮细胞中特异性地表达HSV-tk.中国科学院资助项目; 广东省博士启动基金PubMed中文核心期刊要目总览(PKU)中国科学引文数据库(CSCD)02179-1842