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Expression,Purification and Identification of Deletants of Human TF-1 Cell Apoptosis Related Gene-19 (TFAR19) in E. coli

李现亭
莫晓宁
夏东岚
刘雅楠
宋泉声
张颖妹
马大龙

Publication date

January 2002

DOI

10.3969/j.issn.1007-7626.2002.04.004

Publisher

中国生物化学与分子生物学报

Journal

issn:1007-7626

Abstract

构建TF-1细胞凋亡相关基因19(TF-1 cell apoptosis related gene-19,TFAR19)缺失突变体的原核表达载体,获取缺失突变体蛋白,用于TFAR19促凋亡分子机理的研究.从真核表达载体pcDI-TFAR19扩增出野生型TFAR19和4个缺失突变体,重组到原核表达载体pGEX-4T-2.经亲和层析方法对缺失体蛋白进行纯化后,再利用凝胶过滤的方法进一步纯化.利用抗GST和抗TFAR19的单克隆抗体对蛋白进行免疫学鉴定.用白血病细胞株HL-60检测蛋白活性.成功地克隆并重组了野生型TFAR19及缺失突变体-pGEX-4T-2表达载体,对融合蛋白的表达条件进行了优化.SDS-PAGE结果显示,各个缺失突变体融合蛋白均有较高水平的表达.免疫学检测证实获得了正确的表达产物.活性检测证实,野生型TFAR19和缺失突变体4可以明显促进去血清诱导的HL-60细胞凋亡,第6外显子可能是一个与TFAR19促凋亡活性密切相关的功能结构域.国家自然科学基金中国科学引文数据库(CSCD)04411-4151

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