Expression,purification and preparation of monoclonal antibody of HCA518 protein

目的:对HCA518蛋白进行表达和纯化,并制备HCA518蛋白的单克隆抗体.方法:采用基因重组技术在原核系统表达HCA518蛋白,金属镍螯合的Ni-NAT亲和层析柱进行蛋白纯化;杂交瘤技术建立分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株;ELISA方法进行单克隆抗体细胞株的筛选;Western blot方法鉴定单克隆抗体的特异性;免疫荧光法对HCA518蛋白进行定位.结果:成功表达和纯化了HCA518重组蛋白,其纯度达98%.共筛选出2株分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水并纯化了HCA518的单克隆抗体,腹水中单克隆抗体的效价分别为1×10-4、5×10-4,属于IgG2b亚型和IgM,该抗体能与重组蛋白和肿瘤细胞核蛋白(P100)发生特异性反应,免疫荧光显示HCA518蛋白主要定位于细胞核中.结论:建立了稳定分泌HCA518单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体特异性好,对进一步应用于检测肿瘤组织中HCA518蛋白和判断肿瘤细胞的恶性增生程度预测肿瘤预后具有重要的实用价值.国家重点基础研究发展计划(973计划); 中国科学院资助项目中文核心期刊要目总览(PKU)中国科学引文数据库(CSCD)0129-322