Construction of Expression Vector for Recombinant DT/bFGF Fusion Protein and Purification of Expressed Product
- 张华捷
- 张庶民
- 庄辉
Publication date
January 2006
DOI Publisher
中国生物制品学杂志 Journal
1004-5503Abstract
目的构建重组DT/bFGF融合蛋白表达载体,制备高纯度的DLF融合毒素.方法PCR扩增DT389和bFGF的编码DNA序列,经酶切和连接,克隆至表达载体pET-30a,转化E.coli BL21(DE3),鉴定阳性克隆菌落,经IPTG诱导表达融合蛋白DLF,镍离子螯合层析纯化,用Western blot分析其抗原性.结果测序表明,插入片段可编码含545个氨基酸残基的融合蛋白DLF.SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白可在大肠杆菌中表达,其表达量约占菌体总蛋白的20%,表达形式主要为包涵体.纯化后纯度达90%以上.Western blot证实,该融合蛋白同时具有DT和bFGF两种抗原性.结论已成功构建DT/bF-GF表达载体,并获得较纯的DLF融合毒素.中国科学引文数据库(CSCD)04329-3321
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