目的:利用RNA干扰(RNAi技术,以人组织因子(TF)基因为靶基因,构建特异性的RNA干扰真核细胞表达载体.方法:根据GenBank提供的人TF基因的核苷酸序列,设计具有小发夹结构的2条DNA序列,经退火后成为互补双链,然后将其克隆至干扰载体pSUPER质粒中,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定,最后进行DNA测序.结果:构建成功的针对人TF基因的RNA干扰真核表达载体,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计序列完全一致.结论:成功构建了针对人TF基因的真核载体,使其可能成为肿瘤基因治疗的一种新方法.中国科学引文数据库(CSCD)061118-11204
目的:探讨人转化生长因子TGF-β2特异性siRNA真核表达载体转染人结膜囊成纤维细胞后对其TGF-β2 mRNA表达的影响.方法:体外分离并培养人结膜囊成纤维细胞,在培养后传代3次的细胞以TGF-β...
目的采用反转录PCR(RT-PCR)构建人甲胎蛋白(Alpha-Fetoprotein, AFP)全长基因真核表达载体,为下一步应用以AFP蛋白为靶点的基因治疗作准备.方法体外培养人肝癌细胞HepG2...
目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统.方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科...
目的:构建趋化因子受体CXCR4反义 RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究.方法:用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononucle...
目的:构建人IL-1Ra和人IL-10真核表达质粒载体并检测其表达.方法:用双酶切方法切取PCDI-IL-1Ra和PCDI-IL-10质粒中包含人IL-1Ra和人IL-10 CDS全长序列的cDNA片...
目的构建趋化因子受体CCR5反义RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究.方法用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中获得趋化因子受体CCR5翻译起始区的基因片段,...
目的:探讨MMP-9高表达时人纤维肉瘤细胞HT1080侵袭和转移能力的影响,及对相关机制进行初步研究.方法:将能与MMP-9结合的双链RNA转染到HT1080细胞中.结果:人纤维肉瘤细胞HT1080细...
双链RNA(dsRNA)诱导与之同源的mRNA降解,从而导致转录后基因缄默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)的现象或机制被称为RNA干扰(RNA in...
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)结构蛋白的真核表达载体.方法:用RT-PCR方法扩增HCV结构基因,并将其克隆入真核表达载体pcDNA3中,用磷酸钙转染法将其转入Sp2/0细胞,用免疫组化法检测细胞中...
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种新兴的基因阻断技术,它通过双链RNA分子的介导,特异降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默,自1998年首次报道以来已取得了...
目的 构建小鼠雄激素受体(androgen receptor,AR)基因真核表达载体,转染TM4细胞,建立稳定转染AR的TM4细胞系.方法 应用RT-PCR方法从小鼠睾丸中扩增AR,将测序正确的PCR...
通过检索GenBank的表达序列标签(EST)数据库并结合cDNA末端快速扩增法(RACE)，从小鼠胸腺克隆到一个新的cDNA序列，并从人类肝癌组织中克隆出了其同源cDNA.根据读码框架分析，这两个c...
通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3.1-mCCL19Ig,酶切和测序鉴定插入序列;将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达,通过RT-...
为了研究辐射相关的hsa-miR-663在肿瘤细胞辐射应答通路中的功能，本实验人工合成 其前体并构建入表达载体pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR-663，进一步通过BP/LR重组反应 将hs...
双链RNA介导的遗传干涉的机制是1998年发现的。它通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小...
目的:探讨人转化生长因子TGF-β2特异性siRNA真核表达载体转染人结膜囊成纤维细胞后对其TGF-β2 mRNA表达的影响.方法:体外分离并培养人结膜囊成纤维细胞,在培养后传代3次的细胞以TGF-β...
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目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统.方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科...
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