单链DNA结合蛋白——一个研究蛋白-DNA相互作用的模式系统(英文)

我们设计并构建了一个新的单链DNA结合蛋白模式系统,它的基本骨架(RR)是将噬菌体434野生型阻遏蛋白(cI)的两个N-末端DNA特异性结合域(R)共价相连,RR与cI具有相同的特异性识别和高亲和力结合其DNA操纵子的能力。将RR中与DNA特异性相互作用的5个氨基酸替换成相关噬菌体P22的氨基酸,所得的R~*DNA结合域可特异性高亲和力地识别P22操纵子序列。通过筛选RR和RR~*的特异识别位点及测定其对不同识别序列的亲和力,我们进一步研究了此模式系统的识别特性。在此基础上,我们构建了此模式系统的随机蛋白库,并用它筛选出了一批可特异性识别特定DNA序列的新单链DNA结合蛋白。以上实验结果表明,...