Cloning, expression, purification and identification of secreted protein MPT51 from Mycobacterium tuberculosis

目的 对结核分枝杆菌的一种分泌蛋白MPT51的基因进行克隆,表达,纯化与鉴定,为核酸疫苗的研制与应用打下基础.方法 以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR法对编码MPT51蛋白的抗原基因进行扩增,产物克隆到表达载体pET22b中,构建了含mpt51的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coli XLI-Blue内提取质粒,酶切及测序鉴定,再转化入E.coli BL21(DE3)PLysS菌株内,以IPTG进行诱导后,破菌,离心,包涵体经尿素变性溶解后用His·Bind亲和层析柱纯化,透析复性,纯化后蛋白进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行特异性免疫检测.结果 电泳发现转化了重组质粒的菌株有蛋白表达,所表达的蛋白质相对分子质量为27 800,抗体检测有特异条带,大小为27.8kDa.结论 目的基因克隆到了表达载体内并证明表达,重组结核杆菌分泌蛋白MPT51的成功表达为核酸疫苗的研制与应用和免疫效应检测以及上述抗原、抗体的大规模制备打下基础.中国科学引文数据库(CSCD)0111031-10342