Développement d'une stratégie de criblage du gène MECP2 chez des patientes atteintes d'un syndrôme de Rett : mise en évidence d'un spectre hétérogène de mutations

Ret! syndrome (RTT) IS a progressIVe neurodevelopmentaI disorder affecting almost exclusively females with an incidence of 1 in 15,000. Defined by accurate clinical criteria, RTT is characterized by a period of early normal growth and development followed by regression with loss of speech and acquired motor skills, stereotypical hand movements, and seizures. Althougb 99,5% of cases are sporadic, exclusion mapping using rare familial cases allowed the assignment of the gene responsable for RTT to Xq28. Systematic mutation analysis of candidate genes in the critical region resulted in the identification of mutations inthe MECP2 gene. During this work, we carried out a mutation analysis of MECP2 gene in 255 females with RTT and 15 mentally retarded boys. To identify MECP2 mutations, we developped several complementary approaches (FISH, Southem blot, semi-quantitative PCR, CSGE-sequencing, then DHPLC-sequencing) and provided insights into an heterogeneous spectrum of mutationsat the MECP2 locus in RTT patients. Accordingly, we showed that in addition of point mutations, rearrangements involving several hundreds base pairs can be detected. Moreover and for the first time in RTT girls, we reported cases of somatic mosaicism. Finally, a study at the chromosome level of the MECP2 gene did not reveal any deletion in RTT patients. We found 79% of mutations in RTT patients, our mutation detection rate is in agreement with theIiterature data. Our mutation screening strategy of the ]MECP2 gene is an essential molecular diagnosis tool to confirm the c1inical diagnosis. The link between MECP2 function (global repressor of methylated genes transcription) and disease expression is still unknoWll. Many studies are necessary to understand thephysiological mechanism leading to RTT and eventually to develop therapeutic strategies.La méthylation des cytosines et l'acétylationJdésacétylation des histones constituent deux modifications épigénétiques importantes du génome eucaryote. Elle sont, toutes les deux, impliquées dans la répression transcriptionnelle. La découverte de la famille protéique MeCP (Methyl-CpG-binding protein) et notamment de la protéine MeCP2, archétype de cettefamille, a permis d'établir un lien entre ces deux modifications épigénétiques. En effet, la protéine MeCP2, une fois liée aux cytosines méthylées des dinucléotides 5'CpG3' réprime indirectement la transcription par l'intermédiaire d'un complexe multiprotéique comprenant en plus du co-répresseur Sin-3A, les histones désacétylases 1 et 2 (HDACI et 2). Les HDACI et 2, en désacétylant les histones du nucléosome entraînent la condensation de la chromatine.Récemment, le gène MECP2 codant la protéine MeCP2 a été impliqué dans un retard mental syndromique lié au chromosome X : le syndrome de Rett. Le syndrome de Rett, pathologie rare (1 fille sur 10 000 à 15 000) se caractérise par une période périnatale normale (jusqu'à 618 mois) avant l'apparition des premiers symptômes correspondant à une régression des acquisitions psychomotrices.Nous avons recherché les mutations dans le gène MECP2 chez 255 patientes atteintes d'un syndrôme de Rett et chez 15 garçons retardés mentaux. Nous avons mis en évidence un spectre mutationnel hétérogène du gène MECP2 chez les patientes atteintes d'un syndrome de Rett. En effet, en plus de mutations ponctuelles, le gène MECP2 peut être remanié sur plusieurs centaines de paires de bases. D'autre part, nous rapportons, pour la première fois chez des filles, l'existence de mutations en mosaïque somatique