Comet Assay: Ermittlung von personenbezogenen Quantifizierungsunterschieden und Vergleich verschiedener Zelltypen

Der Comet Assay ist eine schnelle molekularbiologische Methode um DNA-Strangbrüche, oxidative DNA-Schäden und H2O2-induzierte DNA-Strangbrüche zu ermitteln. Aufgrund seiner einfachen und kosteneffizienten Durchführung wird er in vielen verschiedenen wissenschaftlichen Sparten verwendet. Heutzutage stellen die vier großen Hauptbereiche Genotoxizitätstests, humane Biomonitoring-Studien, ökotoxikologische Tests und Tests rund um den Mechanismus der DNA-Schäden bzw. der DNA-Reparatur dar. Allerdings ist der Vergleich der ausgewerteten Daten nach wie vor sehr schwierig, da oft unterschiedliche Protokolle verwendet werden und die Auswertung von verschiedenen Personen erfolgt. In der vorliegenden Studie wurden personenbezogene Quantifizierungsunterschiede bei der Auswertung von Vollblutzellen, PBMC’s und oralen Leukozyten von Diabetes Typ 2 Patientinnen mittels Comet Assay ermittelt. Hierfür wurden die Reserve-Objektträger (Backup Slides) der Querschnittsstudie „MIKRODIAB“ verwendet und quantifiziert. Es zeigten sich signifikante Unterschiede zwischen der Gruppe „Neu“ (Quantifizierung durch eine Person) und der Gruppe „Alt“ (Quantifizierung durch mehrere Personen). Zudem wurden die DNA-Schäden (% DNA im Schweif) aller drei Zelltypen miteinander verglichen und auf Korrelation untersucht. Alle 3 Zelltypen (PBMC, VB, OL) wiesen signifikant unterschiedliche Ergebnisse auf, sowohl in der Gruppe „Alt“ als auch in der Gruppe „Neu“. Zusätzlich wurde keine positive Korrelation zwischen den Zelltypen beobachtet. Der Vergleich der Comet Assay Daten erweist sich dadurch als sehr schwierig, da die DNA-Schäden der einzelnen Zellen aufgrund ihrer Lebensdauer und Sensitivität möglicherweise nicht zu vergleichen sind. Zudem scheint es von großer Bedeutung zu sein, von wie vielen Personen die verschiedenen Zellen ausgezählt werden. Des Weiteren wurden Vollblutzellen ein Jahr bei -80°C aufbewahrt und der Comet Assay erst anschließend durchgeführt. Diese Zellen wurden mit den Vollblutzellen der Gruppe „Neu“ verglichen. Es konnten signifikante Unterschiede der Mittelwerte bei den lysierten Zellen festgestellt werden (0,62±0,29; 1,19±0,55*). Die Enzym-behandelten Zellen wiesen keinen signifikanten Unterschied auf. Vollblutzellen können somit für ein Jahr bei -80°C gut aufbewahrt werden. Zum Vergleich der DNA-Schäden der Diabetikergruppe wurde eine gesunde Referenzgruppe (n=24) herangezogen. Es konnten in beiden Zelltypen (PBMC und VB) signifikante Unterschiede festgestellt werden, wobei die Diabetikergruppe sowohl im Vollblut (6,64±0,69) als auch in den PBMC‘s (5,71±0,72) erhöhte oxidative DNA-Schäden bei den FPG-behandelten Zellen aufwies (p