Desarrollo de nuevos sistemas para la producción de proteínas de fusión por fermentación

119 p.-71 fig.-29 tab.La producción de proteínas de interés en procariotas ha sido estudiada ampliamente en los últimos años, y existen actualmente numerosos avances en este campo de la biotecnología. El sistema de expresión por excelencia en procariotas es la bacteria Gram negativa Escherichia coli, un sistema ampliamente conocido en el que se han basado la mayoría de los avances en la producción de proteínas. Los principales puntos a considerar cuando se quiere producir una proteína recombinante en un sistema procariota son: la expresión génica, el plegamiento, la localización subcelular, la coexpresión de distintas proteínas y el diseño de estrategias que faciliten el procesamiento posterior de las mismas, como la purificación, la renaturalización o la inmovilización de las mismas. Inicialmente se consideran cuatro componentes básicos en la expresión de proteínas: • Elementos genéticos para la transcripción y traducción del gen. Se tiene en cuenta la secuencia del gen, el promotor que dirige la expresión del mismo, el sitio de inicio de la transcripción y las señales de traducción, que dirigirán la síntesis del mRNA y posteriormente de la proteína. • El vector en el que se realiza la construcción. En el caso de sistemas basados en plásmidos, se consideran factores como el tipo de selección, número de copias, estabilidad en el huésped, el origen de replicación, etc. • La cepa destinada a la producción. La cepa debe poseer las señales de expresión óptima para una construcción heteróloga, en lo que se refiere por ejemplo a señales de localización o a la mejora de la estabilidad, tanto de la proteína como del mRNA. • Las condiciones de cultivo de la cepa recombinante. Se tiene en cuenta la velocidad de crecimiento, el momento de la inducción de la transcripción, la producción de biomasa, etc.La realización de esta Tesis Doctoral ha sido posible gracias a la concesión del proyecto de investigación por parte de la Fundación Ramón ArecesPeer reviewe