DNA synthesis in a purine auxotrophic mutant of Chinese hamster cells

Note:When V79 pur 1 cells are maintained in the absence of purines, the cells stop growing but remain viable for up to 48 h. Within the first 6 h after purine deprivation DNA synthesis is inhibited and the cells are arrested in S phase. The purine deoxyribonucleoside triphosphate (dNTP} pools decrease in size and the pyrimidine (dNTP) pools expand. Restoration of purine nucleotides into the medium results in normal rates of DNA synthesis both in vivo and in vitro. Kinetic analyses of DNA synthesis in samples pulsed for 1 min and chased for 1 h show a delay in maturation of newly replicated Okazaki-type pieces to full size DNA. DNA fiber autoradiography reveals a retardation in the rate of replication fork movement but no apparent inhibition of initiation in active clusters of replication units. The results indicate that purine deprivation upsets the intracellular dNTP pool balance and inhibits the elongation of nascent DNA chains.Quand les cellules V79 pur 1 sont maintenues dans un milieu sans purines, elles arrêtent de pousser mais restent vivantes jusqu’à 48 h. Dans les premières 6 h qui suivent la privation des purines la synthèse de l'ADN est inhibée et les cellules sont arrêtées dans la phase S du cycle cellulaire. La grandeur des 'pools' des déoxynucleosides triphosphates (dNTP) des purines diminue et celle des pyrimidines augmente. Le taux normal de la synthèse d'ADN résulte de la restauration des nucléotides des purines dans le milieu aussi bien in vivo qu'in vitro. Une analyse kinésique de la synthèse de l'ADN montre un délai dans la maturation des fragments du type Okazaki nouvellement synthétisés en longues chaines d'ADN. L'autoradiographie des fibres d'ADN révèle un retardement du mouvement de la fourche de réplication. Par contre cette même technique ne met pas en évidence une inhibition d'initiation dans les groupes d'unités de réplication qui sont actifs. Les résultats indiquent que la privation des purines renverse la balance des 'pools' des dNTPs cellulaires et inhibe l'élongation des chaines d'ADN nouvellement synthétisées