Desenvolvimento e avaliação de protocolos para descontaminação de explantes de mangueira visando à micropropagação.

RESUMO: A eliminação de microrganismos é uma condição essencial para o estabelecimento de um processo de regeneração in vitro, pois eles além de competirem pelos nutrientes também produzem toxinas que causam a morte do explante. O trabalho visou desenvolver metodologias de controle de crescimento de microrganismos provenientes de explantes de mangueira inoculados em meio de cultura, como fase inicial do estabelecimento de um protocolo de micropropagação de gemas laterais de mangueira para apoiar o programa de melhoramento desenvolvido na Embrapa. Contudo, uma bactéria de cor esbranquiçada, gram positiva, demonstrou ser resistente a todos os antibióticos, menos ao complexo sulfametaxazol + trimetroprima. Foi verificada a presença de outra bactéria, de coloração rosada e que foi controlada por canamicina, rifampicina, tetraciclina e estreptomicina. Testou-se então, o uso de sulfato de cobre em concentrações até 2000 vezes maior que a indicada para o meio MS e verificou-se que não foi capaz de controlar a bactéria, mas exerceu forte controle da contaminação de fungos endógenos. Com base nesses resultados, inocularam explantes em meio contendo sulfato de cobre, canamicina e o complexo sulfametaxazol + trimetroprima em diferentes concentrações e cada antibiótico isoladamente. Os resultados demonstram que o sulfametaxazol sozinho ou com a trimetroprima controlam o desenvolvimento da bactéria. No entanto, novos estudos são necessários para identificar se esses antibióticos não afetam o desenvolvimento do explante. ABSTRACT: The decontamination of explantes is a basic stage for the plant tissue culture. The objective of this work was to develop a decontamination protocol of internodal segments to establish methods for micropropagation of mango lateral buds. The first step was to develop a superficial decontamination of the explants followed by a control of microrganism growth into the medium. The results demonstrated that explant needs a pre-treatment with neutral detergent in tap water, a mixture with hypochlorite and Tween and 15 seconds of sonication in Benomyl [500 mg.L(elevado a -1)], before incubation in the solution. Treatment with etanol 70% followed by hypochlorite 1 %, and 30 minutes of Benomyl 500 mgL(elevado a -1) immersion was the most efficient for superficial decontamination. In general, the treatments were efficients for decontamination of superficial fungi, however, they did not eliminate contamination of endogenous bacteria and fungi. Inclusion of copper sulfate [25 and 50 mgL(elevado a -1)] into the nutritive medium controlled the endogenous fungi, although it fails to control the endogenous bacteria. The evaluation demonstrated that the bacteria are gram positive and resistant to the antibiotics rifampycin [300 mgL(elevado a -1)], kanamycin [150 mgL(elevado a -1)], ampicylin [150 mgL(elevado a -1)], tetracyclin [150mgL(elevado a -1)], chloramphenicol [150mgL(elevado a -1)], carbenicyllin [150 mgL(elevado a -1)] and streptomycin [300 mgL(elevado a -1)]. However, these results also revealed that the combination of sulphametaxazole + trimetroprim [80 mgL(elevado a -1) + 16 mgL(elevado a -1)] or sulfamethoxazole [80 mgL(elevado a -1)] alone showed satisfactory result on the control of this endogenous bacteria, while trimethoprim (16 mgL') did not work alone. Studies are actually being carried out to evaluate if the antibiotics affect the explant development