Etude de la phagocytose des hémocytes d'huître creuse Crassostrea gigas en présence de bactérie apparentées à Vibrio splendidus

Ifs known that the development the world-wide oyster production is propitious to increase the presence of pathogens, mainly if the activity is not monitorized. Vibrio splendidus related-species were associated with mortalities of mollusks, gorgonians and marine fishes. The present study evaluates the hemocytes capacity of phagocyting different bacterial concentrations and quantifies the living bacteria after the phagocytosis in Crassastea gigas oyster. For that, a colorimetric reagent MTS [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H tetrazolium) and PMS (phenazine metasulphate) was used to identify significant bacterial concentrations in the hemocytes and plasma of C. gigas hemolymph. The utilization of strains virulent and non-virulent has permitted the comparison of virulence effects on the phagocytosis process. It was also tested the sensibility limit of strains concentrations related with the reagent MTS/PMS. Samples were put during ail the assay in micro-plates because of the faster manipulation and betler visualization and distribution of the results.L'élevage de mollusques d'intérêt aquacole et d'huître creuse Crassostreae gigas en particulier est confronté à des agent pathogènes qui ont une incidence économique non négligeable. Parmi eux des bactéries du genre Vibrio, l'un des genres bactériens les plus abondants dans les écosystèmes marins, sont retrouvées associées à des épisodes de mortalité. Ainsi plusieurs souches apparentées à V. splendidus, une espèce dominante de Vibrio, ont été dans quelques cas associées aux épisodes de mortalité estivale d'huître creuse sévissant en France depuis une quinzaine d'année. L'objet de cette étude a porté dans un premier temps sur le développement d'un test de quantification calorimétrique permettant de quantifier la densité bactérienne présente dans un échantillon. Ce test est basé sur l'utilisation de deux réactifs le MTS [3-(4,5-dymhetyltyazol-2-yl)-5-(3-carboximhetoxyphenyl)-2-(4-sulfophenii)-2H-tetrazolium] et le PMS (phenazine metasulphate) comme indicateurs de la prolifération bactérienne. Dans un deuxième temps nous nous sommes intéressés aux interactions in vitro entre vibrions et hémocytes qui constituent les cellules effectrices de l'immunité chez les invertébrés. La cinétique d'évolution d'une souche pathogène (TR32) ajoutée à de l'hémolymphe a été étudiée en cherchant à quantifier les bactéries présentes dans le plasma (libres) et celles associées aux hémocytes lors de la phagocytose