Determinación del efecto de dos protocolos de criopreservación sobre la viabilidad de la célula espermática canina para la raza pastor belga mallinois

The aim of this study is to determine the sperm parameters of fresh semen in the Belgian Shepherd Mallinois dogs as well as determine the effect of two cryopreservation protocols 1 and 2 (Tris citrate and 82 modified INRA) on cell viability canine sperm after thawing. Initial form used 18 dogs aged 2-6 years to determine sperm parameters and then the top five dogs that had the highest parameters were selected, of which three ejaculates per dog were obtained with interval eight days between shots, this collection was made manually. The volume of each ejaculate was divided in equal parts for submission to the protocols. Protocol 1 consisted of half the ejaculate adding with equal volume of medium 82 INRAand modified protocol 2 was added equal volume of business environment based on TRIS-citrate (Minitub®). The diluted semen was packaged in 0.5 ml straws, to which underwent cooling curves and cryopreservation equally for both protocols. The straws are thawed and the sperm concentration parameters, morphology, motility and viability through CASA® system were evaluated. Functionality of the cytoplasmic membrane through hyposmotic test, determination of sperm vitality and sperm morphology by staining nigrosine eosinand evaluation of the integrity of the plasma membrane, acrosomal integrity and mitochondrial function were assessed by microscopy epifluroscencia evaluated. Among the results obtained after thawing significant differences for progressive motility parameters individually for TRIS-citrate with 38.2 ± 26.7% compared to the average found INRA 82 modified with 8.1 ± 7.7% (P = 0.0016), sperm viability 37.7% ± 3.1 for TRIS-citrate and 14.1% ± 2.9 for the modified INRA 82 (P = 0.0000) and hyposmotic test with 49.4% ± 6.6 for TRIS-citrate and 14.4% ± 4.1 for 82 INRA modified (P = 0.0000). Concluding that the average TRIS-citrate makes a better preservation of sperm parameters after thawing canine breed Belgian Shepherd Mallinois. Key words: cryopreservation, canine, sperm, diluent, semen.El objetivo del presente estudio buscó la determinación de los parámetros espermáticos del semen fresco en la raza Pastor Belga Mallinois, así como la determinar el efecto de dos protocolos de criopreservación 1 y 2 (Tris citrato e INRA 82 modificado)sobre la viabilidad de la célula espermática canina pos descongelación. Se utilizaron de forma inicial 18 caninos con edades entre 2 a 6 años para la determinación de los parámetros espermáticos de la raza y posteriormente se seleccionaron los cinco mejores caninos que presentaron los mayores parámetros, de los cuales se obtuvieron tres eyaculados por canino con intervalo de ocho días entre tomas, dicha colecta se realizó de forma manual. El volumen de cada eyaculado se dividió en partes iguales para someterlo a los protocolos. El protocolo 1 consistió en la mitad del eyaculado adicionando con igual volumen demedio INRA82 modificado y el protocolo 2 se le adiciono igual volumen del medio comercial a base de TRIS-CITRATO (Minitub®).El semen diluido fue empacado en pajillas de 0.5 ml, a las cuales se les realizó las curvas de enfriamiento y criopreservación de forma igual para los dos protocolos. Las pajillas se descongelaron y se evaluaron los parámetros espermáticos de concentración, morfología, motilidad y viabilidad mediante el sistema CASA®. Se evaluó la funcionalidad de la membrana citoplasmática por medio del test hiposmotico, determinación de la vitalidad espermática y morfología espermática mediante la tinción de eosina nigrosina y la evaluación de la integridad de la membrana plasmática, integridad acrosomal y función mitocondrial se realizó mediante microscopía de epifluroscencia. Dentro de los resultados obtenidos pos descongelación se encontraron diferencias significativas para los parámetros motilidad individual progresiva para el TRIS-Citrato con 38.2 ± 26.7%frente al medio INRA 82 modificado con 8.1 ± 7.7% (P=0,0016), viabilidad espermatica con 37.7% ± 3.1 para el TRIS-Citrato y 14.1% ± 2.9 para el INRA 82 modificado (P=0,0000) y test Hiposmotico con 49.4% ± 6.6 para el TRIS-Citrato y 14,4% ± 4.1 para el INRA 82 modificado (P=0,0000). Concluyendo que el medio TRIS-Citrato realiza una mejor preservación de los parámetros espermáticos caninos pos descongelación para la raza Pastor Belga Mallinois. Palabras claves: criopreservación, canino, espermatozoide, diluyente, semen