Périfusion des macrophages alvéolaires, une technique nouvelle pour étudier les effets des substances toxiques particulaires ou solubles

Les macrophages alvéolaires participent à la défense du système pulmonaire par la phagocytose des particules inhalées. De plus, en relâchant des médiateurs spécifiques (prostaglandines et enzymes lysosomales) ils prennent part à la réponse inflammatoire causée par des substances toxiques (amiante, silice etc...). Nous avons développé une nouvelle technique de périfusion des macrophages alvéolaires (M.A.) de rat qui nous permet une analyse séquentielle des produits de sécrétion des M.A. ainsi que la mesure de la viabilité et de l'agrégation cellulaire. Les M.A. de rat obtenus par lavages alvéolaires sont introduits dans des tubes de verre dans lesquels ils adhèrent à la paroi. Ils sont alors périfusés à 37°C à raison de 1 ml/h avec du milieu RPMI-1640 (4% de sérum bovin foetal) pendant 18 heures et le milieu de périfusion est recueilli pour permettre la détermination des médiateurs de l'inflammation (prostaglandines E, ?-D-glucuronidase, déshydrogenase lactique). Les M.A. sont conservés pour la détermination de la viabilité et de l'agrégation cellulaire. Cette technique a été utilisée pour étudier la toxicité de diverses substances particulaires et solubles. Elle nous a permis d'obtenir les résultats suivants : 1. Le myristate de phorbol est toxique pour les macrophages alvéolaires et induit une libération de prostaglandines E qui est inhibée par l'indométhacine. 2. L'effet cytotoxique et inflammatoire des chrysotiles canadien (B) et rhodésien (A) dépend de la concentration de fibres utilisées. 3. Le chrysotile lixivié à l'acide oxalique est sensiblement moins toxique que la fibre naturelle. L'étude séquentielle du relâchement de ?-D-glucuronidase indique que le pouvoir inflammatoire de la fibre lixiviée est abaissé pendant les 12 premières heures, rejoignant ensuite celui de la fibre naturelle. 4. Le pouvoir inflammatoire de la fibre traitée à l'oxychlorure de phosphore POCl3 est à peu près identique à celui de la fibre lixiviée. Cependant, cette fibre traitée au phosphate conserve un potentiel cytotoxique élevé, ne différant pas de la fibre naturelle. Le chrysotile traité à l'oxyde calcium CaO ne diffère pas de la fibre naturelle, tant au niveau de la cytotoxicité qu'à celui de la libération de ?-D-glucuronidase. 5. Les effets inflammatoires (?-D-glucuronidase, Prostaglandines E) et toxiques (mortalité et agrégation cellulaire) en présence de fibres de verre JM100 augmentent de façon dose dépendante. Nous avons aussi étudié l'effet de la durée d'exposition des fibres de verre sur les macrophages (1 heure et 18 heures; 50 µg/ml). Nos résultats démontrent que les temps d'exposition des fibres de verre n'affectent pas la réponse cellulaire. Lorsque les macrophages sont en présence de fibre de verre de différentes longueurs, nous observons une diminution marquée de l'inflammation et de la cytotoxicité en diminuant de la longueur des fibres