Rol del AMPc en el dimorfismo del hongo C. Albicans : Efecto del glucagon: Caracterización de la quinasa de proteínas dependiente de AMPc y purificación de sus subunidades

Se investigó el rol del AMPc en la morfogénesis de Candida albicans. El agregado exógeno del nucleótido o de agentes que elevan sus niveles intracelulares estimuló la germinación inducida por N-acetil-glucosamina; el glucagon mostró el mismo efecto estimulatorio, el cual fue bloqueado por su antagonista específico des His1 [Glu9] glucagon amida, indicando una probable interacción de la hormona con un receptor de membrana simil receptor de glucagon. Por imnunofluorescencia indirecta se comprobó la unión de la hormona a la superficie celular de levaduras. Cuando se usó suero como inductor de la germinación el efecto estimulatorio del glucagon aumentó. Anticuerpos anti-glucagon bloquearon el efecto de la hormona. Estos resultados proveen evidencias para la participación del AMPc en el dimorfismo; sabiendo que el principal receptor de AMPc en células eucariotas es la subunidad regulatoria (R) de la quinasa de proteínas dependiente de AMPc (PKA), podemos esperar que esta enzima tenga un importante rol la transición levadura-micelio. La PKA de C. albicans fue caracterizada y sus subunidades puficadas. Es una proteína tetramérica de 287 kDa compuesta por un dímero regulatorio (R) de 128 kDa y dos subunidades catalíticas de 78 kDa. La holoenzima exhibió una cooperatividad positiva en la activación por AMPc y se demostró la existencia de dos sitios de unión a AMPc en la subunidad R. La subunidad R fue fosforilada por la subunidad C a través de una reacción intramolecular, permitiendo clasificar a la PKA como de tipo II. La extrema sensibilidad de la subunidad C a la proteólisis impidió la purificación de la proteína nativa de alto peso molecular. Se caracterizó la fosforilación in vitro de R por CK2 y se investigó el efecto de dicha modificación sobre la funcionalidad de R. Se realizó el estudio de la fosforilación in vivo de la subunidad R