Identificação de marcadores moleculares associados à resistência à Ivermectina em Haemonchus contortus utilizando sequenciamento de nova geração

Resumo: Infecções por parasitos nematoides gastrintestinais - principalmente Haemonchus contortus - constituem um dos principais problemas sanitários e econômicos na indústria da ovinocultura em todo o mundo. A utilização intensiva de produtos anti-helmínticos para o controle dessas infecções levou à seleção de parasitos resistentes às principais drogas atualmente disponíveis, inclusive à lactona macrocíclica ivermectina (IVM), comprometendo a sua utilização. O desenvolvimento e o uso de métodos seguros e eficientes para o diagnóstico e o monitoramento da resistência anti-helmíntica no campo vêm adquirindo importância progressiva, podendo auxiliar o planejamento de programas de controle parasitário, além de retardar a seleção e propagação de parasitos resistentes. A presente tese está dividida em quatro capítulos. O capítulo inicial apresenta uma introdução, abordando a importância do tema, os objetivos e as justificativas para a realização da pesquisa. O segundo capítulo trata de um artigo de revisão publicado no periódico "Pesquisa Veterinária Brasileira", em que se discutem os principais métodos atualmente utilizados para o diagnóstico da resistência anti-helmíntica em nematoides gastrintestinais de pequenos ruminantes. São apresentados os principais testes diagnósticos in vivo e in vitro, bem como suas limitações para uso prático efetivo no laboratório e a campo. Além disso, destacam-se os avanços e o desafio no desenvolvimento de testes moleculares, em especial para o grupo das lactonas macrocíclicas. No terceiro capítulo, relata-se um trabalho de pesquisa também publicado no periódico "Pesquisa Veterinária Brasileira", em que foi avaliada a resistência anti-helmíntica em um isolado de H. contortus usando um teste in vitro de migração de larvas em ágar. Foi comparada a ação de duas drogas (ivermectina - IVM e moxidectina - MOX), identificando o isolado menos suscetível à IVM do que à MOX, e demonstrando o potencial uso desse método. O quarto capítulo descreve um trabalho de pesquisa para detecção de marcadores moleculares associados à resistência à IVM em H. contortus, usando técnicas de sequenciamento de nova geração, de mapeamento genético e de bioinformática, a fim de fornecer novos potenciais marcadores de resistência. Inicialmente, um banco de dados genômico foi produzido a partir do sequenciamento completo do genoma de dois isolados de H. contortus, resistente e suscetível à IVM. Um conjunto final de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs, do inglês single nucleotide polymorphisms) e inserção/deleção (indels, do inglês small insertions and deletions) foi selecionado em regiões genômicas onde se localizam genes que codificam para as superfamílias de transportadores ABC (do inglês ATP binding cassete) e de receptores de canais iônicos abertos por ligante (LGICs, do inglês Ligand-Gated Ion Channel), em que estão presentes genes previamente relacionados à resistência à IVM. Tais variantes específicas podem ser usadas para avaliar e validar marcadores moleculares que possibilitem o avanço de pesquisas para a obtenção de um diagnóstico precoce da resistência à IVM