Avaliação de depósitos de imunoglobinas e complemento pela técnica de imunoperoxidase em cortes de pele fixados em formalina e incluidos em parafina

Orientadora: Leide Parolin MarinoniCo-orientador: Sergio Ossamu IoshiiDissertação (mestrado) _ Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias da SaudeResumo: O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a aplicabilidade da técnica de imunoperoxidase na localização de imunoglobulinas e complemento nas biópsias de pele de pacientes com dermatoses auto-imunes, processadas de maneira rotineira, ou seja, fixadas em formalina e incluídas em parafina. Foi pesquisada a deposição de imunoglobulinas das classes IgG, IgM e IgA e a fração Q do sistema do complemento em casos de dermatoses bolhosas auto-imunes, lúpus, líquen e vasculite. O estudo foi descritivo e retrospectivo, com a recuperação de material incluído em parafina do arquivo do Serviço de Anatomia Patológica do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná e com a aplicação do método imuno-histoquímico da avidinabiotinaperoxidase. A revelação da coloração foi realizada com a utilização do cromógeno diaminobenzidina. Os resultados foram comparados com os obtidos pela análise com a técnica de imunofluorescência, conforme os dados contidos no livro de registro da Seção de Imunopatologia do Serviço de Anatomia Patológica. Quarenta casos foram analisados quanto ao diagnóstico clínico, histopatológico e achados da imunofluorescência. Os depósitos foram considerados positivos quando mostravam coloração marrom escura, diferente da coloração de fundo, e foram observados quatro locais de deposição: zona da membrana basal, intercelular, subepidérmico e vascular. Obteve-se deposição específica com a técnica da imunoperoxidase em 13 casos (32,5%); em cinco (12,5%), os resultados foram negativos para todas as classes de imunoglobulinas e complemento. Desta forma, obteve-se confirmação diagnostica por este método em 45% dos casos. Pela análise com a imunofluorescência, foram obtidos depósitos específicos em 22 casos (55%) e resultaram negativos os mesmos casos negativos pela imunoperoxidase. Houve concordância de resultados positivos pelos dois métodos em apenas 6 casos (15%). A análise estatística dos resultados evidenciou que as duas técnicas foram comparáveis quanto à deposição de IgG, IgM e C3, porém houve diferença significativa quando pesquisada a deposição de IgA (p=0,00596). Não houve correlação significativa dos resultados em relação aos locais de deposição. Com estes dados, concluiu-se que: a técnica de imunoperoxidase permitiu a identificação de depósitos de imunoglobulinas e complemento nos cortes parafinados; os dois métodos foram comparáveis estatisticamente quanto à deposição de IgG, IgM e C3, porém não de IgA, e que esta técnica pode ser utilizada na avaliação de depósitos imunes na pele quando só se dispõe de material fixado em formalina e incluído em parafina.Abstract: The aim of this study was to evaluate the feasibility of the immunoperoxidase technique in the localization of immunoglobulins and complement in biopsies o f patients with autoimmune skin diseases routinely processed, which means, fixed in formalin and embedded in paraffin. The deposition of immunoglobulins from IgG, IgM and IgA classes as well as C3 fraction of the complement system was searched for in cases o f autoimmune bullous dermatosis, lupus, lichen and vasculitis. The study was descriptive and retrospective and samples embedded in paraffin were retrieved from the Hospital de Clinicas o f the Universidade Federal do Parana's Histopathology Department and submitted to the immunohistochemical method o f avidin-biotin-peroxidase (ABC). The stain was developed by the utilization o f the chromogen diaminobenzidine. Results were then compared to those obtained by the analysis with the immunofluorescence technique from the records at the immunopathology section o f the Histopathology Department. Forty cases were analyzed in regard to their clinical, histological and immunofluorescent findings. The deposits were considered positive when yielded a dark brown color, different from the background staining and four sites o f deposition were considered: basal membrane zone, intercellular, subepidermal and vascular. There was specific deposition with the immunoperoxidase technique in 13 cases (32.5%) and in five (12.5%) the results were negative to all classes o f IG and C3. Thus, there was diagnostic confirmation by this method in 45% o f all cases. By the immunofluorescence analysis twenty-two (55%) positive results were obtained and there was no deposition in the same 5 cases found negative with the immunoperoxidase technique. There was agreement with the positive results yielded by the two methods in only 6 cases (15%). The statistical analysis showed that both techniques were comparable in relate to the deposition of IgG, IgM and C3 but there was significant difference when analyzed IgA deposits (p=0.00596). There was no significant correlation of the results regarding the localization o f the deposits. With these data it was concluded that: the immunoperoxidase technique allowed the identification o f immunoglobulin and complement deposits in the paraffin sections, the two methods were statistically comparable in regard to the deposition o f IgG, IgM e C3 but not IgA, and that this technique could be used in the evaluation o f immune deposits in the skin when only formalin-fixed, paraffin-embedded tissue is available