Contribuição ao estudo do metabolismo glicidico em eritrocitos de animais domesticos

Orientadora: Clotilde de Lourdes Brano GerminianiDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias AgrariasResumo: Foi procedido um estudo do metabolismo glicídico do eritrócito de ovinos (Ideal, Suffolk e Corriedale) , de bovinos (Schleswig-Holstein vermelho-e-branco e preto-e-branco) , de eqüinos (P.S.I. e Percheron) e de caninos (Dálmata, Beagle, Dog Alemão, Basset Hound, Doberman e Pastor Alemão). Foram estudados o compartilhamento da glicose sangüínea e a sua distribuição entre o plasma e o eritrócito; o fluxo glicolítico, medido em suspensões eritrócitárias incubadas a 37°C com glicose; e os níveis de enzimas do metabolismo glicolítico (Hexoquinase, H.K.; Fosfoglicose isomerase, PGI; Fosfofructoquinase, PFK; Frutose-1, 6-bisfosfato aldolase, FruP2-ALD; Gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase, GAPDH; Fosfogliceratoquinase, PGK; Fosfopiruvato-hidratase (Enolase) ENO; Piruvatoquinase, PK; Desidrogenase do lactato, LDH; Glicose-6-fosfato desidrogenase, G-6-PDH; Fosfogliconato desidrogenase, 6-PGDH). Em base à determinação dos níveis eritrocitários de enzimas, foram estabelecidos os perfis de enzimas da glicólise para os eritrócitos de cada espécie, com um estudo comparativo das suas concentrações e também em relação aos níveis de HK, neste último caso, com a finalidade de analisar os possíveis pontos de cruzamento sobre o eixo das abcissas. Ainda, com base nos dados de níveis de enzimas eritrocitárias, foram calculados os valores das relações entre pares de enzimas que mantêm, entre si, relação do tipo produto da reação-substrato. A atividade metabólica do eritrócito foi medida quanto à sua capacidade de produzir lactato, a partir da incubação de hemolisados com glicose ou com 2,3-Bisfosfoglice-rato. Foram estabelecidos, também, os valores de hemoglobina glicosilada dos diferentes animais estudados, denominando-se a fração obtida por eluição com fosfato-cianeto, de hemoglobina de eluição rápida (HbER) e a eluida por fosfato-cianeto com força iônica maior, de hemoglobina de eluição lenta (HbEL). As frações obtidas, a partir da cromatografia em resina catiônica BioRex 70, foram submetidas à eletroforese do tipo "DISC" em gel de poliacrilamida e as mobilidades eletroforéticas das diferentes frações obtidas, determinadas. Foi ainda estabelecida correlação entre os valores de HbER e os níveis glicêmicos encontrados, medidos em sangue totalAbstract: A study has been carried out on the glucose metabolism in erythrocytes from the following domestic and farm animals: Ideal, Suffolk. and Corriedale sheeps; red-and-white and black-and-white Schleswig-Holstein cows; thoroughbred and Percheron horses; Dalmatian, Beagle, Great Dane, Basset Hound, Doberman and German shepherd dogs. The compartimentalization of blood glucose between plasma and erythrocytes; the glycolytic flux in red cells suspensions incubated at 37°C with a known amount of glucose; the levels of enzymes from the carbohydrate metabolism (Hexokinase, HK; Phosphoglucose isomerase, PGI; Phosphofructokinase, PFK; Fructose-1,6-bisphosphate aldolase, FruP2-ALD; Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH; Phosphoglyceratekinase, PGK; Phosphopyruvate hydratase-Enolase (ENO); Pyruvatekinase, PK; Lactate dehydrogenase, LDH; Glucose-6-phosphate dehydrogenase, G-6-PDH; 6-Phosphogluconate dehydrogenase, 6-P-GDH) in erythrocytes were studied. Profiles of the glycolytic enzymes in the red blood cells of the different animals studied were established as specific activities. Furthermore, a study on the activity related to hexokinase of the glycolytic enzymes of the different erythrocytes was carried out, besides a study of the ratios between enzymes related to each other on a product of reaction-substrate basis. The metabolic activity of the erythrocytes was assayed in terms of lactate formation after the incubation of the hemolysates either with glucose or with 2,3-Bisphosphoglycerate. Values for glycosylated hemoglobin were also established. For this, the phosphocyanide eluate from the BioRex 70 cation exchange resin was called fast-eluting hemoglobin while the NaCl-phosphate-cyanide eluate fraction was called slow-eluting hemoglobin. Both fractions were analysed by "DISC" plyacrilamide gel electrophoresis and the electrophoretic mobility of the different fractions established. Moreover, a correlation has been established between the percentual values of the fast-eluting hemoglobin fraction and the whole blood sugar levels of the different animal