Detecção, transmissão e patogenicidade de fungos em sementes de peroba rosa (Aspidosperma polyneuron)

Orientadora : Profª. Drª. Ida Chapaval PimentelCoorientador : Prof. Dr. Álvaro Figueredo dos SantosDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 19/02/2016Inclui referências : f. 72-82Área de concentraçãoResumo: A peroba rosa (Aspidosperma polyneuron) é uma espécie florestal nativa da Floresta Estacional Semidecidual, que encontra-se ameaçada de extinção devido à intensa exploração predatória. Com a intensificação da procura por sementes, surge a necessidade de ampliar os conhecimentos sobre a qualidade das sementes de espécies florestais nativas. Frente a isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade sanitária e fisiológica de dez lotes de sementes de peroba rosa, identificando e avaliando fungos que são transmitidos pelas sementes e que possam causar danos à germinação e desenvolvimento das plantas. Foram utilizadas sementes oriundas de quatro regiões do Paraná (Oeste, Sudoeste, Centro-Sul e Noroeste). Para a germinação e vigor foram realizadas seis repetições de 25 sementes em rolos de papel, mantidas em germinador a 25°C por 26 dias com luz contínua. Os parâmetros de vigor avaliados foram a primeira contagem com 12 dias, índice de velocidade de germinação e comprimento de parte aérea e raiz. As análises sanitárias consistiram na detecção de fungos endofíticos e epifíticos, a qual requer níveis diferentes de desinfestação prévia das sementes. Para a detecção de fungos endofíticos (álcool 70% - 1 minuto; hipoclorito de sódio 1% - 4 minutos; álcool 70% - 30 segundos) e epifíticos (álcool 70% - 30 segundos; hipoclorito de sódio 1% - 1 minuto) foi utilizado meio de batata-dextrose-ágar (BDA) e meio seletivo de Fusarium (MSF). O material foi incubado a 20 °C, fotoperíodo de 12 horas de luz/ 12 horas de escuro, por sete dias. Em seguida, determinou-se a incidência (%) dos fungos. Para a transmissão, as sementes não desinfestadas foram semeadas em vermiculita. Avaliou-se a presença de sintomas nas plântulas. Aos 60 dias após a semeadura, as sementes não germinadas foram removidas e colocadas em câmara úmida para observação. Quanto à patogenicidade o teste foi realizado em mudas de peroba rosa, com ferimentos prévios nas folhas e inoculou-se um disco de meio BDA com micélio em crescimento ativo. As mudas foram colocadas em câmara úmida por 72 horas e mantidas por 30 dias em casa de vegetação. Os isolados de Fusarium spp. e Phomopsis spp. selecionados foram identificados por meio de sequências das regiões ITS1-5,8S e ITS2 do DNA ribossomal e região parcial do fator de elongação 1-alpha. A germinação das sementes de peroba rosa variou de 9,3% a 60%. Fusarium spp. e Phomopsis spp. foram os fungos fitopatogênicos encontrados como epífitos nas sementes de peroba rosa, com incidência entre 52 e 25%, respectivamente. Como endófitos apresentaram valores entre 5 e 65%, respectivamente. Houve transmissão de Fusarium spp. e Phomopsis spp. das sementes para as plântulas causando necrose de raízes e cotilédones. 27 isolados de Fusarium spp. e 26 de um total de 32 isolados de Phomopsis spp. foram patogênicos. Por meio das características morfológicas e moleculares foram identificadas sete espécies de Fusarium - Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium verticillioides, Fusarium equiseti, Fusarium fujikuroi, Fusarium pseudocircinatum e Fusarium subglutinans, associadas às sementes de peroba rosa. Quanto à Phomopsis spp., foram identificadas duas espécies: Diaporthe paranensis e Diaporthe oxe. Palavras-chave: Patologia de sementes, sementes florestais nativas, fungos endofíticos.Abstract: The peroba rosa (Aspidosperma polyneuron) is a forest specie, native from the semideciduous forest, which is threatened of extinction due the intense predatory exploitation. The increasing on the demand for seeds arises the need to increase knowledge about the quality of seeds of native forest species. Based on that, the aim of this study was to check the sanitary quality and physiological of ten peroba rosa seed lots, identifying and assessing fungi what are transmitted for seeds and that can cause damage to the germination and development of plants. Ten lots of seeds from four regions of Paraná (West, Southwest, South Central and Northwest) were used. For germination and vigor, six repetitions of 25 seeds were performed in rolls of paper, maintained in germinator at 25 °C for 26 days with continuous light. The vigor parameters evaluated were the first count with 12 days, germination speed index and length of shoot and root. The sanitary analysis consisted in detecting endophytic and epiphytic fungi, which requires different levels of prior disinfection of the seeds. For detection of endophytic fungi (70% alcohol - 1 minute; 1% sodium hypochlorite - 4 minutes; 70% alcohol - 30 seconds) and epiphytic (70% alcohol - 30 seconds; 1% sodium hypochlorite - 1 minute) potato-dextrose-agar (PDA) and Fusarium selective medium (MSF) were used. The material was incubated at 20 °C, with photoperiod of 12 hours light / 12 hours dark, for seven days. Then, it was determined the incidence (%) of fungi. For the transmission test, the non-disinfested seeds were sown in vermiculite. The presence of symptoms in seedlings was evaluated. At 60 days after sowing, the non-germinated seeds were removed and placed in a humid chamber for observation. The pathogenicity test was performed in seedlings of peroba rosa, with previous injuries in the leaves where a disk of PDA with mycellium in active growth was inoculated. The seedlings were placed in humid chamber for 72 hours and maintained for 30 days in a greenhouse. The isolates of Fusarium spp. and Phomopsis spp. selected were identified by sequences of rDNA regions ITS1-5,8S and ITS2 and partial region of the elongation factor 1-alpha. The germination of seeds of peroba rosa ranged from 9.3% to 60%. Fusarium spp. and Phomopsis spp. were the phytopathogenic fungi found as epiphytes in peroba rosa, with incidence between 52 and 25%, respectively. As endophytes, they showed values between 5 and 65%, respectively. There was transmission of Fusarium spp. and Phomopsis spp. from the seeds to seedlings causing necrosis in roots and cotyledons. 27 isolates of Fusarium spp. and only 26 out of 32 isolates of Phomopsis spp. were pathogenic. Through morphological and molecular and characteristics, seven Fusarium species were identified - Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Fusarium verticillioides, Fusarium equiseti, Fusarium fujikuroi, Fusarium pseudocircinatum and Fusarium subglutinans, all associated with peroba rosa seeds. Regarding the Phomopsis spp., two species were identified: Diaporthe paranensis and Diaporthe oxe. Keywords: Seed pathology, native forest seeds, endophytic fungi