Análisis del perfil de microRNA en la eliminación de los progenitores esqueléticos de los espacios interdigitales embrionarios

RESUMEN: El análisis de secuenciación masiva de RNA de pequeño tamaño, en combinación con diversos análisis por qPCR, pusieron de manifiesto la implicación de los microRNA en la regulación de los eventos que conducen a la regresión del tejido presente en el espacio interdigital, en los autopodios de los embriones de pollo. Durante el periodo de remodelación tisular se detectaron, a partir del análisis por secuenciación masiva, un total de 612 secuencias de microRNA de pollo (gga-miRNAs) ya conocidos, y 401 secuencias no identificadas. 36 microRNA, representados por más de 750 lecturas por millón, mostraron expresión diferencial entre las etapas 29HH (6 id) y 32HH (7,5 id ), que corresponden al inicio y al pico de la muerte celular interdigital. Veinte microRNA aumentaron su nivel de expresión al menos 1,5 veces, y 16 disminuyeron su nivel de expresión por lo menos 0,5 veces. Entre los microRNA que aumentaron su nivel de expresión encontramos microARN con reconocidas funciones proapoptóticas, de respuesta a la inflamación e implicados en senescencia celular, además de microRNA capaces de inducir cambios en el Matriz extracelular. En contraste, los microRNA con efectos antiapoptóticos demostrados en otros sistemas disminuían su nivel de expresión. En conjunto estos hallazgos indican un papel positivo de los miARN en el control de la muerte celular durante el proceso de regresión tisular.ABSTRACT: Next-generation sequencing in combination with quantitative polymerase chain reaction analysis revealed a dynamic miRNA signature in the interdigital mesoderm of the chick embryonic limb in the course of interdigit remodelling. During this period, 612 previously known chicken miRNAs (gga-miRNAs) and 401 nonidentified sequences were expressed in the interdigital mesoderm. Thirty-six microRNAs, represented by more than 750 reads per million, displayed differential expression between stages HH29 (6 id) and HH32 (7.5 id), which correspond to the onset and the peak of interdigital cell death. Twenty miRNAs were upregulated by at least 1.5-fold, and sixteen were downregulated by at least 0.5-fold. Upregulated miRNAs included miRNAs with recognized proapoptotic functions in other systems, miRNAs associated with inflammation and cell senescence and miRNAs able to induce changes in the extracellular matrix. In contrast, miRNAs with known antiapoptotic effects in other systems, became downregulated. Together, these findings indicate a role for miRNAs in the control of tissue regression and cell death in a characteristic morphogenetic embryonic process based on massive apoptosis.Esta Tesis ha sido financiada con las siguientes ayudas: • Ayuda predoctoral de formación de personal investigador (FPI) BES-2012-059674 asociada al proyecto de investigación BFU2011-24169. Ministerio de Economía y Competitividad. • Proyecto de investigación BFU2014-54026P. Ministerio de Economía y Competitividad