Estudio de los microsatélites y miniSTRs del cromosoma X de aplicación forense

Este trabajo se ha centrado en el estudio de microsatélites del cromosoma X, que se encuentran lo suficientemente próximos para ser analizados conjuntamente como haplotipos, con el objetivo de obtener los recursos necesarios para reconstruir pedigríes familiares que permitan resolver casos complejos de parentesco. Además, se ha focalizado en el desarrollo de nuevas herramientas moleculares para aumentar la eficacia del análisis de muestras de ADN altamente degradado y/o escaso. En primer lugar se presenta la reacción multiplex denominada sextaplex que permite amplificar los bloques haplotípicos DXS10079-DXS10074-DXS10075 localizado en Xq12 y DXS6801-DXS6809-DXS6789 localizado en Xq21, los cuales proveen haplotipos estables de generación en generación. En segundo lugar se presenta la reacción multiplex denominada miniX, que mediante tecnología miniSTRs, permite amplificar la totalidad de X-STRs incluidos en la reacción sextaplex, además de los loci DXS7132 y DXS6799, los cuales se incluyen dentro del primer bloque y segundo bloque respectivamente. En tercer lugar se lleva a cabo el análisis de los loci del cromosoma X (DXS8378, DXS9898, DXS7133, GATA31E08, GATA172D05, DXS7423, DXS6809, DXS7132, DXS9902 y DXS6789) mediante la reacción decaplex optimizada y validada en un estudio colaborativo del GHEP-ISFG, y de esta manera comparar los resultados de los loci compartidos con sextaplex (DXS6809 y DXS6789) y miniX (DXS7132, DXS6809 y DXS6789). La concordancia de los resultados obtenidos por miniX con las reacciones multiplex decaplex y sextaplex, convierten a miniX en una herramienta altamente fiable para su uso en identificación humana. Asimismo, ofrece una alta sensibilidad, al posibilitar la obtención de perfiles completos a partir de cantidades superiores a 20 pg de ADN molde y una gran capacidad de analizar fragmentos de ADN degradado que no superen las 220 pb. Los 15 X-STRs de las tres reacciones multiplex en conjunto (sextaplex, miniX y decaplex) se analizan en 157 tríos familiares formados por abuelo materno, madre y uno o más hijos varones, pertenecientes a dos subpoblaciones de la provincia de Cantabria (zona costera de Santander y valle del Pas). El estudio comparativo entre las dos subpoblaciones tiende a mostrar una diferenciación clara en la distribución de frecuencias alélicas, por lo que es necesario crear bases de datos independientes, para realizar la correcta valoración estadística en estudios forenses y de parentesco. Los parámetros de interés forense han demostrado que los 15 X-STRs, son altamente polimórficos (valores superiores a 0,50, en la mayoría de los casos); presentan una elevada heterocigosidad (con valores medios de 0,72 y 0,69 en la costa de Cantabria y en el valle del Pas respectivamente); poder de discriminación elevado tanto en mujeres (con valores medios de 0,87 y 0,84 en la costa de Cantabria y en el valle del Pas respectivamente) como en hombres (con valores medios de 0,72 y 0,68 en la costa de Cantabria y en el valle del Pas respectivamente) y poder de exclusión elevado tanto en trios (valores medios de 0,67 y 0,64 en la costa de Cantabria y en el valle del Pas respectivamente) como en dúos (valores medios de 0,53 y 0,50 en la costa de Cantabria y en el valle del Pas respectivamente); además de una adecuada tasa de mutación por locus (2x10-3). Estos resultados demuestran que todos los marcadores analizados ofrecen los valores óptimos necesarios para obtener un alto índice de paternidad o alta razón de verosimilitud desde el punto de vista forense. Finalmente, los grupos de ligamiento DXS7132-DXS10079-DXS10074-DXS10075 en Xq12 localizado en una región de 2, 343 Mb y DXS6801-DXS6809-DXS6789-DXS6799 en Xq21 que localizado en una región de 4,887 Mb, presentan frecuencias haplotípicas con una diversidad alta (mayor de 0,9846 en la costa de Cantabria y mayor de 0,9256 en el Valle del Pas). Ello demuestra su utilidad como herramienta en la resolución de casos complejos de parentesco que incluyan individuos pertenecientes a los grupos poblacionales estudiados