Evaluación in vitro de lactobacillus lactis y lactobacillus casei sobre el control de staphylococcus aureus, staphylococcus epidermidis, treptococcus agalactiae y escherichia coli, comoprincipales agentes causantes de mastitis subclínica en vacas holstein

Se evaluó el efecto de Lactobacillus casei y Lactobacillus lactis sobre Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus agalactiae y Escherichia coli. Para ello, se usaron cepas lácticas y patógenas de casa comercial y se aisló cepas patógenas en la Vereda La Victoria, Corregimiento de Catambuco al suroccidente del municipio de Pasto, Nariño, Colombia. Se determinó el efecto de los antibióticos Dicloxacilina, Cefepima, Cefalotina, Ciprofloxacina, Gentamicina, Penicilina, Trimetropim Sulfa y Ampicilina sobre todas las cepas (patógenas y lácticas). Se evaluó la inhibición producida por L. casei y L. lactis y sus sobrenadantes sobre las bacterias patógenas. Se determinaron condiciones gastrointestinales in vitro de crecimiento de las bacterias lácticas a tres niveles de pH (2.5, 4.5 y 7), tres concentraciones de sales biliares (0.5, 1 y 2%), dos de bilis bovina (1 y 1.2%), y dos temperaturas (38 y 45°C). Igualmente se realizó la cinética de crecimiento, reducción del pH, consumo de azúcar total, consumo de proteína y porcentaje de ácido láctico durante la cinética de fermentación. Mediante HPLC se evaluaron los péptidos y los ácidos orgánicos presentes en el sobrenadante de las cepas lácticas. L. casei mostró susceptibilidad a la Ciprofloxacina y Ampicilina, L. lactis a Ciprofloxacina, Gentamicina, Penicilina, Trimetropim Sulfa y Ampicilina. Mientras que S. aureus mostró susceptibilidad y resistencia a todos los antibióticos para la cepa comercial y aislada respectivamente, el mismo comportamiento se presentó con S. epidermidis. Las cepas de S. agalactiae y E. coli aisladas y comerciales mostraron susceptibilidad a los antibióticos. L. casei mostró un efecto de inhibición de S. aureus, S. epidermidis y S. agalactiae, pero no fue efectiva con E. coli, igual comportamiento se observó con el uso del sobrenadante de la bacteria láctica. Por otro lado L. lactis y su sobrenadante inhibieron a todas las cepas patógenas. Aunque se debe tener en cuenta que en ambas cepas, las bacterias aisladas presentaron menores halos de inhibición. En L. casei se encontró crecimiento de 1 x 1010 y 5.1 x 107 UFC/ml para 1 y 1.2 % de bilis bovina; 2.3 x 107 , 1 x 109 y 3 x 108 UFC/ml para 0.5, 1 y 2 % de sales biliares, 1.1 x 1011, 2.0 x 1010 y 1.0 x 1010 UFC/ml para pH de 2.5, 4.5 y 7, mientras que para L. lactis, 0 y 5 x 109 UFC/ml a 1 y 1.2% de bilis bovina; con sales biliares se encontró crecimiento únicamente a 0.5% (5 x 108 UFC/ml); 1.4 x 1012, 6.4 x 1011 y 7.5 x 1011 para pH 2, 4.5 y 7 y 2.8 x 1012 y 3.1 x 1012 UFC/ml para 38 y 45°C. La fase exponencial se encontró a 16:48 horas con un crecimiento de 3 x 1010 UFC/ml para L. casei y 14:48 h y 2 x 1011 UFC/ml para L. lactis. Las variables pH, azúcar, acidez y proteína para L. casei durante la fase exponencial fueron de 4.94, 0.88 mg/l, 2.89 mg/l y 1.9 mg/l, respectivamente, y para L. lactis 4.29, 2.18 mg/l, 0.62% y 0.279 mg/l respectivamente. La prueba de HPLC para péptidos mostró la presencia de una cadena VAL-TIR-VAL en el sobrenadante de las cepas lácticas y para ácidos orgánicos se encontró una producción de 83.46 y 82.9% de ácido láctico para L. casei y L. lactis respectivamente. De esta manera las cepas lácticas evaluadas mostraron buenas características probióticas que permitirían su aplicación en ensayos in vivo para el control de microorganismos causantes de mastitis subclínica en vacas lecheras en sistemas de producción de la región