Phenotypic profiling and passive protection studies of immunosuppressed mice in the course of experimental Francisella tularensis infection

Francisella tularensis (F. tularensis) je vysoce virulentní, fakultativně anaerobní, intracelulární patogen způsobující onemocnění zvané tularémie. Jako i další intracelulární baktérie, infekce baktérií F. tularensis je v první řadě kontrolována T lymfocyty za vzniku ochranné imunity. Nicméně byla také prokázána přítomnost B lymfocytů a cirkulujících protilátek, které jsou nezbytné pro rozvoj imunitní reakce proti primární a sekundární infekci vyvolané F. tularensis. Při vstupu do hostitelské buňky se F. tularensis v hostiteli pomnoží a využívá faktorů virulence pro přežití uvnitř buňky a pro následné šíření tularemické infekce hostitelským organismem. Základní role protektivních protilátek v ochraně proti intracelulárním baktériím však zůstává stále nedostatečně objasněna. Pro studium role B lymfocytů a především úlohy protilátek byl zvolen model imunosuprimovaných Balb/c myších jedinců. V rámci diplomové práce byly provedeny fenotypizační studie buněk krevní řady klasickým krevním rozborem a studie slezinných buněk metodou průtokové cytometrie s využitím imunosuprimovaných Balb/c myší. Dále byly provedeny protektivní studie na stanovení protektivního účinku nově připravených imunních sér z imunosuprimovaných myší. V poslední části této diplomové práce bylo častečně využito imunoproteomické analýzy (2-D elektroforéza, Western blot) imunoreaktivních proteinů F. tularensis LVS s využitím nově připravených imunních sér k částečnému komparativnímu zhodnocení získaných výsledků ve formě diskuze a zároveň potvrzením výsledků protektivních studií. Další případná identifikace konkrétních, nově vybraných imunoreaktivních proteinů F. tularensis LVS nebyla z časových a prostorových důvodů, které poskytuje tato diplomová práce, realizována.Francisella tularensis (F. tularensis) is a highly virulent, facultative anaerobic, intracellular pathogen that causes a disease called tularemia. As well as other intracellular bacterial infection, F. tularensis infection is primarily controlled by T cells to produce protective immunity. However, it has also been demonstrated the presence of B cells and circulating antibodies, which are necessary for the development of an immune response against primary and secondary F. tularenis infection. When F. tularensis entering the host cell, it can replicates in the host, uses virulence factors for survival inside cells and the subsequent spread of infection within tularemic host organism. Basic protective role of antibodies in the protection against intracellular bacteria, however, remains poorly understood. To study the role of B cells, and in particular the role of antibodies, it was chosen the model of immunosuppressed Balb/c mice individuals. Within the thesis the blood cell phenotyping studies was conducted using classic analysis of blood and the study of spleen cells was performed by flow cytometry using immunosuppressed Balb/c mice. Further studies were performed to determine the protective effect of newly prepared protective serum from immunosuppressed mice. In the last part of this thesis, imunoproteomic analysis (2-D electrophoresis, Western blot) of immunoreactive proteins F. tularensis LVS was exploited using newly prepared serum for partial comparative evaluation of the results, while confirming the results of protective studies. Another possible identification of specific and newly selected F. tularensis LVS immunoreactive proteins was not realized due to a time and space impossibility within this thesis.Katedra biologických a biochemických věd1. Prezentace výsledků diplomové práce 2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce 3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k D