Development of HPLC/MS methods for analysis of triacylglycerol stereoisomers

Lipidy jsou významnou součástí lidského organismu a hrají velmi důležitou roli při mnoha metabolických procesech. Identifikace lipidů je nezbytná pro objasnění většiny biochemických procesů v organismu. Porucha metabolismu lipidů může způsobovat řadu onemocnění. Vývoj metod pro analýzu stereoizomerů triacylglycerolů je jedna ze součástí charakterizace celkového lipidového složení vzorku. Jednotlivé triacylglyceroly byly separovány pomocí argentační kapalinové chromatografie a identifikovány pomocí hmotnostní spektrometrie. Byly porovnávány separace směsí triacylglycerolů na připravených argentačních kolonách s komerční kolonou. Na připravených kolonách byla testována jejich schopnost separace stereoizomerů triacylglycerolů. K přípravě komplexačních kolon byly využity také jiné ionty, než stříbrné a jejich separace byla srovnána s argentační kolonou. Pro každou komplexační kolonu byl také optimalizován gradient, tím došlo ke zlepšení separace. Na chirálních kolonách bylo charakterizováno složení stereoizomerů a optických izomerů pro vybrané biologické vzorky. V těchto vzorcích bylo porovnáváno zastoupení jednotlivých izomerů triacylyglycerolů.Lipids are very important part of human organism and they play essential role in many metabolic processes. Their identification is necessary for clarification of most of the biochemical processes in the human body. Lipid metabolism disorders can lead to wide range of serious diseases. Development of analytical methods for triacylglycerol stereoisomers is one of the steps needed for characterization of lipid composition of the sample. Individual triacylglycerols were separated using argentation liquid chromatography and identified using mass spectrometry. Individual separations of triacylglycerol mixtures were compared using prepared argentation columns with commercial column. On the columns we tested their ability of separating triacylglycerol stereoisomers. It was used variety of other then silver ions for preparation of ligand exchange column and compared their separation ability. Composition of stereoisomers and enantiomers in biological samples was also characterized using chiral column. Composition of individual triacylglycerol isomers in the samples were compared.Katedra analytické chemieStudentka přednesla obhajobu své diplomové práce a zodpověděla dotazy oponenta a členů komise