STUDIO DEL METABOLISMO DEI GLUCOCORTICOIDI

Lo studio del metabolismo dei glucocorticoidi (GC) è strettamente correlato alla valutazione dell’attività dell’enzima 11beta-idrossisteroido deidrogenasi (11beta-HSD). E’ noto che tale enzima, responsabile della interconversione del cortisolo a cortisone, gioca un ruolo fondamentale in squilibri metabolici come l’obesità ed il diabete ed è quindi di fondamentale importanza per la diagnosi di numerose patologie. Lo studio dell’attività enzimatica dell’11beta-HSD si basa sia su studi in vivo su vari tessuti e fluidi biologici che su studi in vitro sull’enzima proveniente da varie fonti. Per quanto riguarda lo studio in vivo, l’attività enzimatica viene valutata sia in plasma determinando cortisolo e cortisone che in urina determinando oltre a cortisolo e cortisone anche i rispettivi tetraidro- e allotetraidro- metaboliti. La spettrometria di massa accoppiata a tecniche di separazione in fase liquida (LC/MS) è una tecnica avanzata che consente la determinazione qualitativa e quantitativa di molte molecole organiche presenti in tracce in matrici complesse. Le apparecchiature multi-analizzatore oggi disponibili sul mercato, quali ad esempio gli spettrometri di massa a triplo quadrupolo, permettono la messa a punto di metodi basati su tecniche di spettrometria di massa tandem (MS-MS), che sono caratterizzati da elevata sensibilità e specificità, e che forniscono dati analitici estremamente accurati. Nel presente lavoro di tesi, sarà affrontato lo studio del metabolismo dei glucorticoidi in vivo valutando diversi aspetti. Poichè i metaboliti del cortisolo e del cortisone vengono escreti in urina principalmente come glucuronati e solfati sarà valutata la possibilità di preparare tali derivati da utilizzare come standard nell’analisi di campioni reali. Parallelamente sarà studiata l’idrolisi per via enzimatica delle forme coniugate allo scopo di determinare le condizioni sperimentali ottimali per la determinazione del contenuto totale in urina dei composti in esame. Sarà infine necessario mettere a punto un metodo per la determinazione di cortisolo, cortisone e dei rispettivi metaboliti in urina mediante LC/MS. In questo ambito particolarmente importante sarà la preparazione del campione: i metodi già noti in letteratura saranno utilizzati ed eventualmente sviluppati