Messa a punto di una procedura per la determinazione di isoforme di gamma-glutammiltransferasi sierica.

Riassunto La rilevanza clinica della ¦Ã-glutammiltrasferasi sierica (sGGT) ¨¨ recentemente aumentata a causa delle numerose associazioni epidemiologiche oltre a quelle della patologia epatica. Il test della determinazione della GGT sierica totale risulta aspecifico in quanto numerosi fattori patologici e fisiologici concorrono ad alterarne il valore. In questo lavoro di tesi ¨¨ stata messa a punto una metodologia basata sulla cromatografia in gel filtrazione seguita dall¡¯iniezione post-colonna di un substrato fluorescente per la GGT (¦Ã-glutammil-7-amido-4-metilcumarina), un metodo che permette la quantificazione delle frazioni di GGT nel plasma. Sono state ottimizzate le condizioni di reazione post-colonna (concentrazione di substrato e di accettore, tempo della reazione, geometria e materiale della spira di reazione). La distribuzione dei pesi molecolari ¨¨ stata analizzata in volontari sani (20 maschi; et¨¤ media (SD) 38 (10) anni; femmine; 44 (13) anni; GGT totale rispettivamente 21 (11) e 13 (7), P< 0.01). Questo metodo risulta sensibile (limite di determinazione: 0.5 U/L) con un range dinamico lineare tra 0.5 e 150 U/L per tutte le frazioni. Sono state individuate quattro frazioni in tutti i soggetti, in entrambi i sessi. Il volume di eluizione dalla colonna non varia per le singole frazioni ed ¨¨ stato possibile determinarne il peso molecolare. Le frazione sono state nominate big-GGT (b-GGT), medium-GGT (m-GGT), small-GGT (s-GGT) associate a lipoproteine, PM>2000, 940, 140 KDa rispettivamente, e una frazione libera nel plasma (f-GGT, 70 KDa). Questa tecnica permette l¡¯identificazione delle specifiche frazioni di GGT, ci¨° pu¨° aumentare la sensibilit¨¤ e la specificit¨¤ del test di determinazione della GGT