C7. Perfil de expressão génica por PCR em tempo real em doentes VIH negativos com tuberculose multirresistente

Em resposta à estimulação imunológica crónica induzida pelo M. Tuberculosis, os doentes com tuberculose multi-resistente (MDR-TB) regulam positiva e negativamente a expressão de vários genes. Assim, a quantificação relativa do RNA mensageiro de genes envolvidos na resposta imunológica pode ser útil para o esclarecimento da imunopatologia da MDR-TB abrindo perspectivas para uma intervenção imunomodulatória.O presente estudo teve como objectivo a avaliação da expressão génica associada a MDR-TB.Analisaram-se sangues periféricos de 18 doentes MDR-TB e 17 controlos saudáveis. A quantificação relativa dos mRNAs de genes com importância na resposta imune (citocinas, quimiocinas, receptores activadores e inibidores, etc.) foi efectuada por PCR em tempo real com sondas Taqman®. Utilizou-se um painel de primers e sondas específicas para os seguintes 20 genes: IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-g, TGF-b, TNF-a, TNF-b, RANTES, MCP1, MIP1b, IP-10, CTLA-4, CD28, CD80 and CD86. No grupo MDR-TB, os genes das seguintes citocinas mostraram-se regulados positivamente: IFN-g (1.8 logs; p<0.001), IL-10 (2.3 logs; p<0.05), IL-2 (3.0 logs; p<0.001), IL-4 (3.4 logs; p<0.00001) e TNF-b (1.1 logs; p<0.05). Observou-se ainda uma tendência para aumento de expressão da IL-6 (1.0 logs; p=0.054) e uma ligeira diminuição da IL-1b, embora sem significado estatístico. Outros genes com funções imuno-reguladoras importantes (e.g. CD28, RANTES, CD86) apresentaram níveis de mRNA alterados.No seu conjunto, estes resultados corroboram a noção de activação imunológica crónica em curso nos doentes MDR-TB. Contudo, a expressão de citocinas inibidoras de uma resposta Th1 (v.g. IL-10, IL-4) sugere a manutenção de uma resposta imunológica ineficaz na tuberculose multi-resistente : In response to chronic stimulation of M. tuberculosis, multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) patients up-regulate and downregulate the expression of several genes. Thus, relative quantification of mRNA from genes involved with the immune response could be helpful to elucidate the immunopathology of MDR-TB giving clues to immune modulation.The purpose of this study was to evaluate immunologic gene expression profile associated with MDR-TB.Peripheral blood drawn from 18 MDR-TB patients and 17 healthy control individuals was analysed. Real-time PCR analysis with Taqman® probes was used for relative quantification of mRNAs from genes with important involvement in immune response (cytokines, chemokines, activatory and inhibitory receptors, etc). A panel of primers and probes specific for the following 20 genes was used: IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IFN-g, TGFb, TNF-a, TNF-b, RANTES, MCP1, MIP1b, IP-10, CTLA-4, CD28, CD80 and CD86.In the MDR-TB group, the following cytokine genes were found significantly up-regulated: IFN-g (1.8 logs; p<0.001), IL-10 (2.3 logs; p<0.05), IL-2 (3.0 logs; p<0.001), IL-4 (3.4 logs; p<0.00001) and TNF-b (1.1 logs; p